体细胞克隆技术是保护优良品种和濒危动物最有效而理想的途径之一。本研究利用黄牛卵母细胞作为受体胞质，黑牦牛细胞作为核供体，旨在通过对体细胞和激活方式等方法的改进，进而优化异种体细胞克隆牦牛胚胎体外发育的技术平台。 利用植块法和消化法建立雄性和雌性黑牦牛耳成纤维细胞系，比较了供体细胞不同性别、不同细胞周期同期化处理方式及冷冻对异种克隆牦牛胚胎发育的影响。结果显示：雄性供体细胞的异种克隆牦牛囊胚发育率显著高于雌性供体细胞(56.6％vs.39.5％，P<0.05)，但卵裂率和囊胚细胞数无显著性差异；血清饥饿和接触抑制提供的供体细胞对异种克隆牦牛胚胎发育率和胚胎质量的影响没有明显差别；供体细胞冷冻后解冻组的克隆胚胎卵裂率明显低于新鲜消化组(54.5％vs.78.2％，P<0.05)，但两组之间的囊胚率和囊胚细胞数无显著性差异。表明供体细胞的性别对异种克隆牦牛囊胚发育有影响，而细胞同期化处理和细胞冷冻对异种克隆牦牛囊胚发育影响较小。 研究不同激活方法以及融合到激活间隔时间对牦牛异种体细胞克隆胚胎发育的影响。试验分为四个组，A.化学激活(CHX)+延迟0.5h；B.化学激活(CHX)+延迟1h；C.电激活+化学激活(ECHX)+延迟0.5h；D.电激活+化学激活(ECHX)+延迟1h。结果显示：延迟1h激活卵裂率和囊胚发育率均高于延迟0.5h激活。电激活辅助化学激活可以提高异种克隆牦牛胚胎的总细胞数和ICMl的比例。延迟1h激活ICM的比例都高于延迟0.5h激活，但无显著性差异。延迟lh激活联合电激活辅助化学激活可以提高ICM：TN的比例，达到20.5±7.5％，与正常牛体内胚胎的比例接近。试验结果说明延迟激活1h和电激活辅助化学激活可以提高异种克隆牦牛胚胎发育率和胚胎质量，是适合牦牛胚胎发育的激活方案。 比较了OPS玻璃化冷冻法和程序化冷冻法对异种克隆牦牛胚胎冷冻解冻后胚胎发育率的影响。OPS法玻璃化冷冻解冻后胚胎存活率达到81.3％，而程序化冷冻法解冻后胚胎存活率仅为26.7％，试验结果表明OPS法玻璃化冷冻更适宜异种克隆牦牛胚胎的冷冻保存。选择鲁西黄牛作为胚胎移植受体，182枚新鲜异种克隆牦牛胚胎，移植受体50头次，60天后进行直肠检查，有2头受体牛妊娠，但到第4个情期返情。