目的：探讨miR-34a/KLF4在X射线外照射诱发小鼠肝细胞凋亡时的调节作用机制,为进一步阐明miR-34a在电离辐射损伤发生中的作用提供实验依据,并推动以其为靶点的辐射损伤救治新手段的探索。方法：1.双荧光素酶活性实验检测miR-34a对KLF4的靶向作用。对数生长期的小鼠肝细胞瞬时转染miR-34a模拟物和抑制剂后,Real-Time PCR方法检miR-34a和KLF4mRNA表达,western blot蛋白印记法检测KLF4蛋白表达。2.对数生长期的小鼠肝细胞,经10Gy X射线照射后不同时间点收集细胞,采用流式细胞仪检测细胞凋亡变化,Real-Time PCR方法检测miR-34a表达。瞬时转染miR-34a模拟物和抑制剂后,流式细胞仪检测10Gy X射线照射小鼠肝细胞凋亡变化。慢病毒干扰KLF4后,流式细胞仪检测10Gy X射线照射小鼠肝细胞凋亡变化。结果：1.生物信息学软件预测,发现miR-34a在KLF4-3’UTR有一个序列保守的潜在靶位点。为了验证miR-34a和KLF4的靶点作用关系,构建了含KLF4-3’UTR结合序列的报告基因质粒。双荧光素酶活性实验发现,miR-34a可显著抑制KLF4-3’UTR结合序列的报告基因质粒的荧光素酶活性。此外,实时定量PCR (real time PCR)及免疫印迹(western blot)分析结果显示,肝细胞内KLF4的mRNA水平和蛋白水平表达均受到miR-34a的抑制。2小鼠肝细胞系BNL CL.2经10Gy X射线照射后,miR-34a的表达显著上升。可见,10Gy X射线照射可上调肝细胞中miR-34a的表达水平。分别利用成熟miR-34a模拟物(miR-34a mimics)过表达和miR-34a抑制齐(?)(miR-34a inhibitor)下调肝细胞内源miR-34a的水平并检测肝细胞凋亡情况的变化。结果显示,miR-34a模拟物可显著促进肝细胞凋亡。相反,miR-34a抑制剂却显著抑制了肝细胞凋亡。用慢病毒干扰技术干扰KLF4的表达,观察到肝细胞经10Gy X射线照射所产生的凋亡率显著升高,与miR-34a模拟物作用效果相似。结果表明miR-34a可通过抑制KLF4的表达而正性调控肝细胞凋亡发生。结论：1.KLF4是miR-34a的直接靶基因。2. miR-34a/KLF4促进10Gy X射线照射后肝细胞的凋亡,正性调控肝细胞凋亡的发生。