外源性NGF对体外培养的成骨细胞增殖、分化和矿化的影响

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目的临床实践中常常会发现,截瘫和颅脑损伤患者伴随有四肢骨折时,往往在骨折断端可见到大量不成熟的骨痂生长,甚至肌肉内可以出现异位骨化。同时,一些神经疾病患者的骨折成骨量也较一般人多,因此可以认为神经系统参与了骨折的愈合过程。作为神经系统中重要的营养因子NGF对骨组织中最重要的细胞成骨细胞的影响现在还不是十分清楚。因此本实验研究外源性神经生长因子(NGF)对体外培养的成骨细胞增殖、分化和矿化的影响。方法取出生24h Wistar大鼠颅盖骨,剃净后剪成碎块,采用改良组织块混合酶消化法培养成骨细胞,将不同浓度的NGF(1pg╱ml,10pg/ml,100pg/ml,500pg/ml,1000pg╱ml)加入成骨细胞的培养基继续进行细胞培养,7天后用MTT法测定细胞的增殖情况,碱性磷酸酶试剂盒检测成骨细胞碱性磷酸酶的活性,免疫组织化学染色法检测Ⅰ型胶原的量,3周后茜素红钙染法检测矿化结节形成。结果对成骨细胞增殖的影响:低浓度的NGF(<100 pg/ml)OD值明显较对照组高(P<0.05),统计学上有显著性差异;对成骨细胞分化的影响:500 pg/ml,100 pg/ml,10 pg/ml这三个浓度组的ALP活性(OD值)较对照组高(P<0.05),分泌Ⅰ型胶原的量(OD值)也较其他各组高(P<0.05),差异有统计学意义;对成骨细胞矿化的影响,各组无显著性差异。结论外源性NGF对体外培养的成骨细胞具有增殖作用、可以促进成骨细胞的分化,增强ALP的活性,促进Ⅰ型胶原的分泌,但不能明显的促进成骨细胞的矿化。
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