1型糖尿病（Type 1 Diabetes,T1D）是一种好发于儿童和青少年时期的自身免疫性疾病,以胰岛β细胞永久性破坏为特征。目前对于触发T1D发生的自身抗原尚不清楚,尽管可用识别胰岛细胞抗原的抗体来协助T1D诊断,但针对这些抗原进行的免疫耐受治疗并未在临床上取得很好的疗效。为做好T1D的早期诊断,我们需要去寻找诱发T1D的自身免疫反应的始动抗原,进一步去探索T1D发生和胰岛损伤的病理机制,供于T1D的预防、早期诊断和确诊。内源性逆转录病毒（Endogenous retrovirus,ERV）是已整合到基因组的古老逆转病毒的残留物,包含Gag和Env。逆转录病毒元件可能作为新抗原使细胞致敏,从而触发自身免疫反应。课题组前期研究发现:来自于NOD小鼠胰岛的间充质干细胞（Mesenchymal stem cells,MSCs）可以释放高度免疫刺激的微泡（Microvesicles,MVs）或外泌体（Exosomes,EXOs）能够诱导自身反应性的B细胞和T细胞。重要的是,EXOs表达ERV Gag抗原。通过构建敲除Gag蛋白(GagKD)的EXOs,发现Gag是激活自身反应性T细胞的核心抗原。因此,Gag抗原很有可能是一种新的自身抗原。非肥胖型糖尿病小鼠（Non-obese diabetic mice,NOD）是一种能自发T1D的模型鼠,发病过程和病理变化与人患T1D过程相似,是T1D研究的重要模型鼠。通过对幼年NOD小鼠、发病前期NOD小鼠胰腺染色观察Gag抗原在胰岛中的表达,找寻Gag抗原与T1D发病的联系。主要得到以下结果:1)分析从NOD雌性小鼠胰岛中克隆出的命名为Gag 194的氨基酸序列,选取了Gag 194 193’-vsrlrgrrdppavdstts-210’多肽为靶点制备ERV Gag单克隆抗体;2)通过KLH偶联Gag多肽免疫小鼠,我们得到了5株单克隆抗体,分别是1F4C8、2D4C6、3C3B9、4D6B3、5F9E4,其抗体亚型均为Ig G2b;3)通过ELISA和蛋白质印迹实验（Western Blot,WB）检测抗体效价和特异性,我们观察到制备的5株单克隆抗体在特异性、敏感性和抗原谱上存在一定的差异。最后,我们选取了3株单克隆抗体（1F4C8、2D4C6、5F9E4）进行生物素化标记;4)通过免疫组织化学实验观察Gag抗原在NOD小鼠和T1D抗性的C57BL/6小鼠胰腺胰岛中的表达情况及与疾病发生的联系。我们使用幼年NOD小鼠、成年NOD小鼠、幼年C57BL/6、成年C57BL/6胰腺冰冻切片进行组织染色。观察到,3株单克隆抗体均能识别表达在NOD小鼠胰岛的Gag抗原,抗原的表达与NOD小鼠的年龄无关,而C57BL/6小鼠胰岛不表达Gag蛋白。另外,Gag抗原在胰岛中的分布多在β细胞区域,而浸润胰岛的淋巴细胞很明显并不表达该抗原。因此NOD小鼠胰腺表达ERV Gag抗原可能受其特异的基因型控制,并且在幼年时期就已经开始表达。以上结果为将来进一步研究Gag蛋白是否是始动抗原诱发自身免疫反应以及如何诱发自身免疫反应提供了新思路,制备的单克隆抗体为T1D的基础研究提供了至关重要的工具。