【摘 要】
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背景及目的:紫杉醇作为一种放射增敏剂,能稳定微管系统,把细胞阻断在G2/M期从而改变肿瘤细胞的放射反应性。但其分子调控机制目前还未完全阐明,本文旨在研究紫杉醇的放射增敏
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背景及目的:紫杉醇作为一种放射增敏剂,能稳定微管系统,把细胞阻断在G2/M期从而改变肿瘤细胞的放射反应性。但其分子调控机制目前还未完全阐明,本文旨在研究紫杉醇的放射增敏作用及其分子机制。研究方法:克隆形成实验分析不同浓度紫杉醇联合不同照射剂量对KB细胞生长抑制率的影响,多靶单击拟合模型方程测定各组细胞放射增敏比(SER)并评价增敏效果;流式细胞仪检测KB细胞经紫杉醇及射线共同作用后细胞周期分布变化;采用基因芯片技术筛选与紫杉醇放射增敏作用相关的差异表达基因,在分析这些基因的基础上采用荧光定量PCR技术验证芯片提示的细胞分裂相关基因PRC1、Cyclin B2的变化。结果:紫杉醇与射线协同作用能明显抑制KB细胞增殖,20nmol/l药物协同射线作用时SER Do及SER Dq分别为2.40±1.87、12.23±2.81。药物加照射处理后G1期细胞由48.32±2.40%下降为15.73±7.00%(P＜0.01),G2/M期细胞由13.66±2.16%上升到52.51±5.02%(P＜0.01),凋亡率与单纯加药组相比有所下降,为11.78±0.49%(P＜0.05)。基因芯片结果显示的差异变化基因中共有176条与紫杉醇放射增敏作用相关,10条在调控细胞分裂过程中起作用,其中上调表达2条,下调表达8条。荧光定量PCR证实与细胞分裂相关的PRC1和Cyclin B2均下调表达,与芯片结果一致。结论:紫杉醇对KB细胞有明显的放射增敏作用,其机制可能是使细胞有丝分裂相关基因PRC1和Cyclin B2表达特异性下调,导致双极纺锤体形成受阻,细胞无法完成正常的分裂,形成多核细胞,从而使细胞增殖受到抑制并最终死亡。本课题应用基因芯片技术在分子生物学水平上进行基因筛选,寻找与放射增敏有关的基因,以期为肿瘤治疗及药物研究提供新的基因靶点,具有重要的指导意义。
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