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研究目的:研究护肝益肺方减毒(防治抗结核药肝损伤等不良反应)的效应及物质基础,为护肝益肺方药用于临床辅助治疗结核病提供理论依据,并可有助于结核病辅助治疗中药制剂的研发。研究方法:1.提取护肝益肺方、拆分后的护肝方的水提液和醇提液;再从护肝方中找出存在的物质成分;继而筛选出潜在的有效成分作为护肝方的物质基础加以验证;最后将单体成分与护肝方进行药效分析对比,研究治疗肝损伤的作用机制。2.通过肝脏病理学检查及血清生化指标两方面评价造模情况,从生理指标、病理指标、行为学指标等方面研究护肝益肺方、护肝方的水提物和醇提物对药物性肝损伤的保护作用。全自动生化分析仪检测血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)、总胆红素(TBIL)、碱性磷酸酶(ALP)等生化指标;ELISA检测试剂盒检测肝组织SOD活性及MDA、GSH含量测定;采用RT-PCR法检测小鼠肝细胞中CYP2E1 mRNA的表达、qPCR法检测肝细胞中Mrp2 mRNA的表达来探究其发挥调节作用的信号通路,以确定其作用机制。3.运用UHPLC-Q-TOF/MS技术对护肝方中的五味药进行成分检测,以推测真正的药效物质基础成分。查阅国内外文献建立成分库,利用Peakview 1.2软件鉴别样品中化学成分,结合MarkerView 1.2.1软件对样品进行主成分分析。研究结果:1.通过异烟肼、利福平(剂量:100 mg/kg异烟肼+400 mg/kg利福平)联用两周可致药物性肝损伤,肝脏病理学检查及血清生化指标证明造模成功。护肝益肺全方、护肝方各剂量组能显著抑制肝损伤模型小鼠血清中总胆红素(TBIL)(P<0.01)和碱性磷酸酶(ALP)的升高(P<0.05),亦能抑制肝组织中丙二醛(MDA)的升高(P<0.01),增强肝组织中超氧化物歧化酶(SOD)的活性和谷胱甘肽(GSH)的水平(P<0.05)。病理切片观察也显示护肝益肺全方、护肝方各剂量组较模型组肝细胞脂肪变性明显减轻。2.将所得数据导入Peak View 1.2软件中,匹配度达到85%以上的化学成分被鉴别确认,正、负离子两种模式下共鉴别出156种化合物。3.对于五种成分联用的药对组,TBIL、ALP均远小于模型组,差异有统计学意义(P<0.05),而甘草酸、虎杖苷、胡黄连等成分对于减毒效应并不明显,ALP差异无统计学意义(P>0.05)。可提高Mrp2 mRNA的表达水平,降低CYP2E1 mRNA的含量水平。结论:1.护肝益肺方、护肝方能明显抑制TBIL、ALP的升高,显著升高药物性肝损害小鼠肝匀浆中SOD、GSH降低的水平且能抑制肝组织中MDA的升高;病理切片HE染色后光镜观察发现能降低药物性肝损害小鼠肝组织变性、甚至坏死的程度,具有修复肝细胞,恢复肝功能的作用,且作用机制与抗氧化作用有关。2.初步探究出护肝方中的有效成分对血清中TBIL、ALP有抑制作用,升高SOD、GSH降低MDA,表明齐墩果酸、五味子醇甲、甘草酸、虎杖苷、胡黄连苷Ⅱ等几种单体成分对模型小鼠的肝损伤具有保护作用;可提高Mrp2mRNA的表达水平,降低CYP2E1的含量水平,明确其发挥调节作用的机制。虽未达到总方的减毒效应,但初步探明了护肝益肺方的物质基础。课题意义:通过研究护肝益肺方药减毒(防治抗结核药肝损伤等不良反应)作用机制、初步探究其物质基础,为护肝益肺方药用于临床辅助治疗结核病提供理论依据、并可促进结核病辅助治疗中药制剂的研发。