第一部分IL-27在急性移植物抗宿主病中的作用及机制研究目的:通过清髓性小鼠异基因造血干细胞a GVHD模型,研究IL-27在异基因造血干细胞移植后a GVHD中的作用及机制。方法:本实验采用BALB/C（H-2^d）小鼠,野生型（WT）C57BL/6（H-2^b）小鼠和C57BL/6（H-2^b）IL-27基因敲除(IL-27^-/-)小鼠作为供体,BALB/C（H-2^d）小鼠作为受体。受体BALB/C小鼠接受全身致死性辐照（X-Ray,6.5 Gy）,分别移植BALB/C（H-2^d）小鼠和野生型C57BL/6（H-2^b）小鼠来源的1×10⁷个骨髓细胞和5×10⁶个脾细胞。辐照分两次进行,每次3.25Gy,两次辐照间隔4小时,以缓解胃肠道辐照毒性。移植后第3,7,14天取小鼠的脾、肝、肺组织,提取RNA并逆转录为DNA。Real-time PCR检测小鼠移植后各靶器官中IL-27的相对表达量,并用ELISA检测小鼠移植后血清中IL-27的表达量。受体BALB/C小鼠接受全身致死性辐照（X-Ray,6.5Gy）,分别移植野生型C57BL/6小鼠来源的1×10⁷个骨髓细胞和5×10⁶个脾细胞,C57BL/6小鼠来源的1×10⁷个骨髓细胞和IL-27^-/-小鼠来源的5×10⁶个脾细胞。观察小鼠生存并对GVHD临床表现进行病理评分。移植后14天,收集小鼠肝、肺、小肠和皮肤,通过H&E染色进行病理组织学分析。观察并记录移植后小鼠的生存情况。移植后2周取小鼠脾脏、肝脏、肺淋巴细胞,通过流式染色检测各靶器官中异基因T细胞反应,以及调节性T细胞（Regulatory T cell,Treg）的比例。在体外实验中,通过混合淋巴细胞反应检测IL-27对T细胞增殖的影响。受体BALB/C小鼠接受全身致死性辐照（X-Ray,6.5 Gy）,分别移植野生型C57BL/6小鼠来源1×10⁷个骨髓细胞和5×10⁶个脾细胞,C57BL/6小鼠来源1×10⁷个骨髓细胞和IL-27^-/-小鼠来源5×10⁶个脾细胞,在移植后2周,检测WT和IL-27^-/-小鼠体内各GVHD靶器官中调节性T细胞（Regulatory T cell,Treg）的比例。在体外实验中,通过CD3/CD28刺激检测IL-27对调节性T细胞分化的影响。结果:（1）与同基因移植相比,在脾,肝,肺中异基因移植后IL-27的表达量相对较高,并且异基因移植后血清中IL-27表达量也相对较高。（2）在小鼠急性移植物抗宿主病中,输注WT小鼠来源的骨髓细胞和IL-27^-/-小鼠来源脾细胞的受体死亡较快,而输注WT小鼠来源的骨髓细胞与脾细胞的生存较长。（3）供体IL-27基因敲除能显著加重a GVHD的发病,a GVHD评分相对较高,促进GVHD相关死亡。肝、肺、小肠和皮肤的病理损伤也较对照组严重。（4）体外实验中,IL-27^-/-组可促进T细胞的增殖,并可促进T细胞的早期凋亡。（5）与WT组小鼠相比,IL-27^-/-组小鼠脾,肝,肺中的CD4⁺T细胞的比例和数目显著增加。（6）与WT组小鼠相比,IL-27^-/-组小鼠的脾肝中的CD3⁺T细胞CD8⁺T细胞活化显著升高。（7）IL-27^-/-组小鼠内分泌IFN-γ的CD4⁺和CD8⁺T细胞的比例和数目显著增加。（8）与WT组小鼠相比,IL-27^-/-组小鼠血清中IFN-γ,TNF-α,IL-6表达升高。（9）IL-27基因敲除后调节性T细胞的比例显著减少。结论:与同基因移植相比,IL-27的表达量在异基因移植后升高。IL-27基因敲除显著加重GVHD的发病进程并缩短小鼠生存。IL-27在小鼠急性移植物抗宿主病中具有保护作用。供体IL-27基因敲除促进CD4⁺T细胞的增殖及其炎性因子IFN-γ的分泌。IL-27对Treg细胞的分化有促进作用。IL-27可能通过调控调节性T细胞依赖的方式抑制急性移植物抗宿主病。第二部分异基因造血干细胞移植后病人血清中IL-27预测急性移植物抗宿主病中的临床价值目的:检测血清白细胞介素-27（IL-27）的表达水平,探究其在异基因造血干细胞移植后急性移植物抗宿主病（a GVHD）的预测价值。方法:收集2012年1月至2012年12月67例allo-HSCT患者预处理前的血清。所有患者均采用清髓性预处理方案,环孢素A（Cs A）+霉酚酸酯（MMF）+短程甲氨蝶蛉（MTX）预防移植物抗宿主病（GVHD）。通过ELISA试剂盒检测血清中IL-27的表达水平。我们回顾性地评估预处理前血清中IL-27的表达水平,探究其对a GVHD的预测价值。结果:II–IV度a GVHD患者血清IL-27表达水平明显降低（0-I度:35.57±14.34pg/ml;II-IV度:27.66±6.74pg/ml;P<0.05）。IL-27对II–IV度a GVHD有较好的预测价值（AUC=0.70,95%CI 0.528-0.789,P=0.029）。IL-27表达水平<26.85pg/ml更易发生II–IV度a GVHD（P=0.01）。多因素分析证实IL-27表达水平<26.85pg/ml是II–IV度aGVHD最强的危险因素（HR=3.005,95%CI 1.14-6.86,P<0.01）。结论:低表达IL-27水平可以预测异基因造血干细胞移植后患者II–IV度a GVHD的发病率。