【摘 要】
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目的:制备和鉴定抗8-异前列腺素（8-iso-prostaglandin F 2alpha,8-iso-PGF2α）单克隆抗体;制备8-iso-PGF2α测定试剂盒（ELISA）;应用该试剂盒测定缺氧缺血性脑病（hypoxic-ischemic
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目的:制备和鉴定抗8-异前列腺素（8-iso-prostaglandin F 2alpha,8-iso-PGF2α）单克隆抗体;制备8-iso-PGF2α测定试剂盒（ELISA）;应用该试剂盒测定缺氧缺血性脑病（hypoxic-ischemic encephalopathy,HIE）新生儿尿8-iso-PGF2α水平。 方法:利用碳二亚胺法（EDC）连接半抗原8-iso-PGF2α和载体蛋白BSA/OVA,免疫BALB/C小鼠,将免疫成功的小鼠脾细胞与SP2/O融合后利用间接ELISA筛选出阳性克隆并扩大培养,阳性克隆制备腹水后进行提纯。应用辣根过氧化物酶标记8-iso-PGF2α,制备ELISA法测定试剂盒,并测定126例正常新生儿和151例HIE患儿尿8-iso-PGF2α含量。 结果:获得一株稳持续定分泌抗8-iso-PGF2α单克隆抗体的细胞株。ELISA试剂盒中的8-iso-PGF2α抗体包被浓度为1μg/ml,温育时间为30分钟,Cutoff值为0.14+NC,所需样本量为100μl,试剂盒37℃放置7天OD450值无明显变化。正常新生儿尿8-iso-PGF2α水平为27.4±9.8ng/mmol·Cr,而轻、中和重度HIE患儿分别为65.3±13.2、154.6±31.6和241.7±41.0 ng/mmol·Cr,差异有统计学意义（p<0.01）;以尿8-iso-PGF2α47.0、91.7和217.5ng/mmol·Cr作为区分正常与轻度、轻度与中度、中度与重度HIE的界限,其敏感性和特异性分别为95.2%和99.2%、100%和95.2%、65.8%和100%。 结论:应用抗体工程技术可获得8-iso-PGF2α单克隆抗体。应用8-iso-PGF2α试剂盒（ELISA）的稳定性好,可准确测定新生儿尿8-iso-PGF2α水平,是一项评估HIE患儿病情可靠而简便的生化指标。
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