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目的：研究诱导膜蛋白联合丹参提取物促进大鼠BMSCs成骨分化的作用，探讨诱导膜蛋白、丹参提取物促进BMSCs成骨分化作用与HIF-1α信号通路的关系。
方法：将实验分为空白组、丹参提取物组（实验组1）、诱导膜蛋白组（实验组2）、诱导膜蛋白联合丹参提取物组（实验组3），采用不同的培养基培养大鼠骨髓间充质干细胞。空白组：用完全培养基（含10%胎牛血清、1%青链霉素溶液）培养细胞。实验组1：用含有浓度为0.8mg/ml丹参提取物的完全培养基培养细胞。实验组2：用含有浓度为100μg/ml诱导膜蛋白的完全培养基培养细胞。实验组3：用含有浓度为100μg/ml诱导膜蛋白和浓度为0.8mg/ml丹参提取物的完全培养基培养细胞。采用以上不同培养方法培养BMSCs1周后，用CCK-8检测各组细胞增殖情况；倒置显微镜观察各组细胞形态变化；茜素红染色检测各组细胞矿化结节形成并选取3个视野进行计数，实时定量RT-PCR检测各组细胞成骨标志物（ Runx-2、Col1、OCN）基因的表达水平，Western blot检测各组细胞成骨标志物（Runx-2、Col1、OCN）蛋白的表达水平，Western blot检测各组细胞HIF-1α及下游因子（iN?OS、TGF-β、VEGF）蛋白的表达水平。
结果：①通过CCK-8实验检测发现，与空白组相比，丹参提取物组、诱导膜蛋白组、诱导膜蛋白联合丹参提取物组的细胞在培养24h、48h、72h后，细胞的增殖无明显影响（P＞0.05）；②细胞形态变化，在倒置显微镜下可以看出：空白组的细胞呈长梭形，丹参提取物组、诱导膜蛋白组、诱导膜蛋白联合丹参提取物组的细胞则变成梭形或短梭形，其中一些呈现鳞片状或多边形，可以看出经丹参提取物、诱导膜蛋白处理的细胞在形态上发生了变化，初步说明BMSCs已向成骨方向分化。③根据茜素红染色图片及计数可以看出，与空白组相比，丹参提取物组、诱导膜蛋白组、诱导膜蛋白联合丹参提取物组的矿化结节数量明显增多；与丹参提取物组相比，诱导膜蛋白组、诱导膜蛋白联合丹参提取物组的细胞矿化结节明显增多,矿化结节着色加深；与诱导膜蛋白组相比，诱导膜蛋白联合丹参提取物组的细胞的矿化结节明显增多。④实时定量RT-PCR检测发现，与空白组相比，丹参提取物组、诱导膜蛋白组、诱导膜蛋白联合丹参提取物组的细胞成骨标志物(Runx-2、Col1、OCN)基因表达水平升高，差异有统计学意义(P＜0.05)；与丹参提取物组相比，诱导膜蛋白组、诱导膜蛋白联合丹参提取物组的细胞成骨标志物(Runx-2、Col1、OCN)基因表达水平升高，差异有统计学意义(P＜0.05)；与诱导膜蛋白组相比，诱导膜蛋白联合丹参提取物组的细胞成骨标志物(Runx-2、Col1、OCN)基因表达水平升高，差异有统计学意义(P<0.05)。⑤ Western blot实验发现，与空白组相比，丹参提取物组、诱导膜蛋白组、诱导膜蛋白联合丹参提取物组的细胞成骨标志物(Runx-2、Col1、OCN)蛋白表达水平升高，差异有统计学意义(P＜0.05)；与丹参提取物组相比，诱导膜蛋白组、诱导膜蛋白联合丹参提取物组的细胞成骨标志物(Runx-2、Col1、OCN)蛋白表达水平升高，差异有统计学意义(P<0.05)；与诱导膜蛋白组相比，诱导膜蛋白联合丹参提取物组的细胞成骨标志物(Runx-2、Col1、OCN)蛋白表达水平升高，差异有统计学意义(P＜0.05)。⑥Western blot实验发现，与空白组相比，丹参提取物组、诱导膜蛋白组、诱导膜蛋白联合丹参提取物组的细胞 HIF-1α及下游因子（iN?OS、TGF-β、VEGF）蛋白表达水平升高，差异有统计学意义(P＜0.05)；与丹参提取物组相比，诱导膜蛋白组、诱导膜蛋白联合丹参提取物组的细胞HIF-1α及下游因子（iN?OS、TGF-β、VEGF）蛋白表达水平升高，差异有统计学意义(P＜0.05)；与诱导膜蛋白组相比，诱导膜蛋白联合丹参提取物组的细胞HIF-1α及下游因子（iN?OS、TGF-β、VEGF）蛋白表达水平升高，差异有统计学意义(P＜0.05)。
结论：1.丹参提取物能促进大鼠BMSCs细胞成骨分化。
2.诱导膜蛋白能促进大鼠BMSCs细胞成骨分化。
3.与丹参提取物相比，诱导膜蛋白促进大鼠BMSCs细胞成骨分化作用更强。
4.与丹参提取物、诱导膜蛋白相比，诱导膜蛋白联合丹参提取物培养的大鼠BMSCs成骨分化作用更强。
5.丹参提取物、诱导膜蛋白促进BMSCs成骨分化可能与激活HIF-1α信号通路有关。
方法：将实验分为空白组、丹参提取物组（实验组1）、诱导膜蛋白组（实验组2）、诱导膜蛋白联合丹参提取物组（实验组3），采用不同的培养基培养大鼠骨髓间充质干细胞。空白组：用完全培养基（含10%胎牛血清、1%青链霉素溶液）培养细胞。实验组1：用含有浓度为0.8mg/ml丹参提取物的完全培养基培养细胞。实验组2：用含有浓度为100μg/ml诱导膜蛋白的完全培养基培养细胞。实验组3：用含有浓度为100μg/ml诱导膜蛋白和浓度为0.8mg/ml丹参提取物的完全培养基培养细胞。采用以上不同培养方法培养BMSCs1周后，用CCK-8检测各组细胞增殖情况；倒置显微镜观察各组细胞形态变化；茜素红染色检测各组细胞矿化结节形成并选取3个视野进行计数，实时定量RT-PCR检测各组细胞成骨标志物（ Runx-2、Col1、OCN）基因的表达水平，Western blot检测各组细胞成骨标志物（Runx-2、Col1、OCN）蛋白的表达水平，Western blot检测各组细胞HIF-1α及下游因子（iN?OS、TGF-β、VEGF）蛋白的表达水平。
结果：①通过CCK-8实验检测发现，与空白组相比，丹参提取物组、诱导膜蛋白组、诱导膜蛋白联合丹参提取物组的细胞在培养24h、48h、72h后，细胞的增殖无明显影响（P＞0.05）；②细胞形态变化，在倒置显微镜下可以看出：空白组的细胞呈长梭形，丹参提取物组、诱导膜蛋白组、诱导膜蛋白联合丹参提取物组的细胞则变成梭形或短梭形，其中一些呈现鳞片状或多边形，可以看出经丹参提取物、诱导膜蛋白处理的细胞在形态上发生了变化，初步说明BMSCs已向成骨方向分化。③根据茜素红染色图片及计数可以看出，与空白组相比，丹参提取物组、诱导膜蛋白组、诱导膜蛋白联合丹参提取物组的矿化结节数量明显增多；与丹参提取物组相比，诱导膜蛋白组、诱导膜蛋白联合丹参提取物组的细胞矿化结节明显增多,矿化结节着色加深；与诱导膜蛋白组相比，诱导膜蛋白联合丹参提取物组的细胞的矿化结节明显增多。④实时定量RT-PCR检测发现，与空白组相比，丹参提取物组、诱导膜蛋白组、诱导膜蛋白联合丹参提取物组的细胞成骨标志物(Runx-2、Col1、OCN)基因表达水平升高，差异有统计学意义(P＜0.05)；与丹参提取物组相比，诱导膜蛋白组、诱导膜蛋白联合丹参提取物组的细胞成骨标志物(Runx-2、Col1、OCN)基因表达水平升高，差异有统计学意义(P＜0.05)；与诱导膜蛋白组相比，诱导膜蛋白联合丹参提取物组的细胞成骨标志物(Runx-2、Col1、OCN)基因表达水平升高，差异有统计学意义(P<0.05)。⑤ Western blot实验发现，与空白组相比，丹参提取物组、诱导膜蛋白组、诱导膜蛋白联合丹参提取物组的细胞成骨标志物(Runx-2、Col1、OCN)蛋白表达水平升高，差异有统计学意义(P＜0.05)；与丹参提取物组相比，诱导膜蛋白组、诱导膜蛋白联合丹参提取物组的细胞成骨标志物(Runx-2、Col1、OCN)蛋白表达水平升高，差异有统计学意义(P<0.05)；与诱导膜蛋白组相比，诱导膜蛋白联合丹参提取物组的细胞成骨标志物(Runx-2、Col1、OCN)蛋白表达水平升高，差异有统计学意义(P＜0.05)。⑥Western blot实验发现，与空白组相比，丹参提取物组、诱导膜蛋白组、诱导膜蛋白联合丹参提取物组的细胞 HIF-1α及下游因子（iN?OS、TGF-β、VEGF）蛋白表达水平升高，差异有统计学意义(P＜0.05)；与丹参提取物组相比，诱导膜蛋白组、诱导膜蛋白联合丹参提取物组的细胞HIF-1α及下游因子（iN?OS、TGF-β、VEGF）蛋白表达水平升高，差异有统计学意义(P＜0.05)；与诱导膜蛋白组相比，诱导膜蛋白联合丹参提取物组的细胞HIF-1α及下游因子（iN?OS、TGF-β、VEGF）蛋白表达水平升高，差异有统计学意义(P＜0.05)。
结论：1.丹参提取物能促进大鼠BMSCs细胞成骨分化。
2.诱导膜蛋白能促进大鼠BMSCs细胞成骨分化。
3.与丹参提取物相比，诱导膜蛋白促进大鼠BMSCs细胞成骨分化作用更强。
4.与丹参提取物、诱导膜蛋白相比，诱导膜蛋白联合丹参提取物培养的大鼠BMSCs成骨分化作用更强。
5.丹参提取物、诱导膜蛋白促进BMSCs成骨分化可能与激活HIF-1α信号通路有关。