[目 的]1.分离、鉴定大鼠骨髓间充质干细胞（bonemarrow-derivedmesenchymalstem cell,BMMSC）,比较常氧培养BMMSC（n-BMMSC）、低氧预处理BMMSC（hypoxia-precondition BMMSC,hp-BMMSC）增殖活力、归巢到损伤肝脏能力的差异。2.比较 n-BMMSC、hp-BMMSC、雷帕霉素干预的 hp-BMMSC（rapa-hp-BMMSC）对肝脏缺血再灌注损伤（hepatic ischemiareperfusioninjury,HIRI）模型大鼠肝脏保护效应的差异及随时间的变化。3.研究不同处理的BMMSC减轻HIRI效应差异的分子机制,为增强BMMSC对HIRI的疗效和提高BMMSC治疗效率提供机制参考。[方法]1.分离培养SD大鼠BMMSC,诱导成骨、成脂肪、成软骨分化后染色,结合流式细胞术检测其表面的间充质干细胞标志分子以鉴定BMMSC。2.1%O2、5%CO2、94%N2培养 24h 建立 hp-BMMSC 模型,用 CCK-8 试剂盒检测 21%O2 培养的 n-BMMSC、hp-BMMSC、rapa-hp-BMMSC 的增殖活力,明确hp-BMMSC的增殖活力能否被rapa干预抑制。3.用荧光染料CM-Dil标记n-BMMSC、hp-BMMSC后经门静脉输注给HIRI模型大鼠,再灌注12 h后取材观察以比较两者归巢到损伤肝脏的差异。4.阻断大鼠70%肝脏血供45 min构建HIRI模型,再灌注开始后经门静脉分别输注n-BMMSC、hp-BMMSC、rapa-hp-BMMSC悬液或等量新鲜细胞培养基,12 h、24 h、48 h后检测血清转氨酶、SOD、MDA水平,评估肝脏病理损伤,Western Blotting法检测IL-6、IL-1β、TNF-α的表达以比较不同细胞治疗对HIRI保护效果的差异。5.用 RT-qPCR 和 Western Blotting 检测不同 BMMSC 中mTOR、HIF-1α的mRNA和蛋白表达以研究hp增强BMMSC对HIRI保护效应的分子机制。[结果]1.大鼠BMMSC经诱导成骨、成脂、成软骨分化并染色证实,具有诱导多向分化的潜能;流式细胞术检测BMMSC的MSC标志分子阳性率达到鉴定MSC的标准。因此,本实验成功地分离并鉴定了大鼠BMMSC。2.1%O2培养24 h是最佳的hp-BMMSC方案,其增殖活力较n-BMMSC显著提高。3.相同剂量下,hp-BMMSC归巢到HIRI肝脏的阳性率较n-BMMSC显著升高,这表明hp后BMMSC的迁移、归巢到损伤肝脏的能力增强。4.n-BMMSC降低了肝脏转氨酶,降低肝组织MDA并升高SOD活性,抑制了炎症因子IL-6、IL-1β和TNF-α的表达,这一效应在再灌注前12h最明显。相比n-BMMSC,hp-BMMSC进一步增强了上述肝脏保护效应,但rapa-hp-BMMSC的肝脏保护作用较n-BMMSC无明显变化。5.hp-BMMSC中的mTOR、HIF1α的mRNA和蛋白表达均显著上调,而rapa干预后以上mTOR、HIF-1α的表达上调被明显抑制,提示hp-BMMSC增强对HIRI的保护效应可能受mTOR-HIF-1α轴调控。[结论]1.机械分离、选择性贴壁培养结合诱导分化染色和流式细胞术鉴定可以获得批量大鼠BMMSC,为后续实验提供了稳定的细胞来源。2.hp是提高BMMSC增殖活力,增强其归巢能力的有效方法。相较常氧培养,hp增强了 BMMSC在HIRI中抑制炎症因子介导的损伤、促进肝功能恢复肝脏保护的效应。3.再灌注前12 h是HIRI中肝脏免疫应答最活跃、炎症性损伤最重的阶段。无论n-BMMSC还是hp-BMMSC,对肝脏的保护效应在这一时段内最明显。4.hp-BMMSC可能通过mTOR-HIF-1α信号轴调控其对低氧微环境的适应,从而维持干细胞特性并增强对HIRI的保护作用。