犬瘟热（canine distemper,CD）是由犬瘟热病毒（canine distemper virus,CDV）感染引起的是以呼吸系统、消化系统和神经系统功能紊乱为主要特征的传染病。犬细小病毒病是由犬细小病毒（canine parvovirus,CPV）感染引起的以呕吐、腹泻为特征的消化道传染病。疫苗接种是主要的防控手段,但CPV商品化疫苗存在免疫失败现象。对于CPV而言,VP2是主要的中和性抗原,为了研发针对流行CPV毒株疫苗,本研究将中国2010年至2019年公布的所有CPV野毒株基因组归纳整理,并通过遗传进化分析发现2a、2b和2c是当前我国CPV流行的主要亚型。同时,将疫苗株与野毒株的VP2蛋白氨基酸比对发现在87、93、101、300、323、426等关键氨基酸位点存在极大的突变,突变率分别为98.8%、100%、98.8%、100%、100%、100%。因此,研发针对当前流行毒株的疫苗将为该病的防控提供有力工具。为了能同时防控犬瘟热与犬细小病毒病,本研究拟构建基于犬瘟热病毒为载体的犬瘟-犬细小重组二联疫苗。本研究将CPV当前流行的主要亚型的代表毒株的VP2基因插入到CDV基因组P与M之间,利用CDV反向遗传操作技术成功拯救出表达CPV不同亚型的VP2蛋白的重组CDV,分别命名为rCDV-2a、rCDV-2b和rCDV-2c;间接免疫荧光实验与western blotting结果表明三种重组CDV均可以表达VP2蛋白,且VP2基因的插入对CDV-11的体外复制、扩增等生物学特征没有显著影响。本研究进一步在小鼠模型中测定了rCDV-2a、rCDV-2b和rCDV-2c的免疫原性,实验结果表明,rCDV-2a、rCDV-2b、rCDV-2c与CDV-11产生的CDV中和抗体水平相当,且重组病毒能同时产生针对CPV保护水平以上的血凝抑制抗体。最后,通过连续传代的手段确定了rCDV-2a、rCDV-2b和rCDV-2c的遗传稳定性。总之,本研究通过生物信息统计分析发现犬细小病毒2a、2b和2c是我国当前主要流行亚型,并利用CDV作为载体成功构建了rCDV-2a、rCDV-2b和rCDV-2c犬瘟-犬细小重组二联疫苗株,且三者均具有良好的遗传稳定性和免疫原性,为研究新型的犬瘟-犬细小重组二联疫苗奠定基础。