【摘 要】
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Pseudomonas alcaligenes A1(类产碱假单胞菌)能在Hg2+质量浓度约为120mg/L的海水培养基中正常生长,其生物富集能力约为179.53mg/g。为了探究海洋细菌A1的高汞抗性以及富集行为机制,对该细菌进行了转录组分析。通过注释分析后发现,相对于无Hg2+胁迫下生长的A10,在Hg2+胁迫下生长的A11共有772个基因差异表达显著,包括上调基因663个,下调基因109个。
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Pseudomonas alcaligenes A1(类产碱假单胞菌)能在Hg2+质量浓度约为120mg/L的海水培养基中正常生长,其生物富集能力约为179.53mg/g。为了探究海洋细菌A1的高汞抗性以及富集行为机制,对该细菌进行了转录组分析。通过注释分析后发现,相对于无Hg2+胁迫下生长的A10,在Hg2+胁迫下生长的A11共有772个基因差异表达显著,包括上调基因663个,下调基因109个。BAGLEAN10002699,BAGLEAN10002700,BAGLEAN10002701,BAGLEA N10002702均为表达差异倍数较大且与汞抗性相关的功能基因,通过blast程序比对后发现,以上四个基因分别为merA,merP,merT,merR基因,均为汞操纵子上的关键功能基因,分别编码汞还原酶MerA、汞周质结合转运蛋白MerP、汞转运蛋白MerT以及汞调节蛋白MerR。其中merT,merP具有三个完整的重复拷贝,而merA,merR只有一个完整的重复拷贝。通过实时荧光定量反转录PCR技术检测merT,merP,merA,发现在不同汞离子水平下的转录水平为:merP>merT>merA。为了从细胞层面进一步研究海洋细菌A1的汞抗性以及富集行为机制,我们利用基因工程技术将目的基因定向克隆至pRSFDuet-1以及pACYCDuet-1质粒,并转化至宿主细胞E.coli BL21(DE3)中表达,成功构建了TP、TPA和A重组菌。通过分析抗性生长曲线发现,对照组E.coli BL21仅能在2mg/L Hg2+的LB培养基中生长,而重组菌TP、TPA、A具有一定的抗汞能力,分别最高能在60,40,20mg/L Hg2+的LB培养基中生长,但随着Hg2+浓度的增加,抗性菌株的迟缓期均不同程度地延长。三种重组菌TP、TPA、A与对照组E.coli BL21对Hg2+的平衡富集量分别为110.48mg/g,94.49mg/g,83.76mg/g和82.29mg/g。综上所述,海洋细菌A1可能主要通过merT和merP两个功能基因实现对汞的抗性以及富集功能。本研究对A1细菌的汞抗性以及富集行为机制所进行的探索将为海洋环境中重金属污染的生物治理奠定实验基础。
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