论文部分内容阅读
目的:内毒素败血症是由微生物感染引起的全身性炎症反应综合征,具有极高的死亡率,是目前重症监护病房的重要死亡原因。细菌内毒素(Endotoxin)是革兰氏阴性菌细胞壁上脂多糖(Lipoplysaccharide,LPS)和微量的蛋白复合物,已被认为是诱导败血症的主要物质。板蓝根作为我国传统中药,具有清热解毒、凉血利咽的功效,在临床上广泛用于抗炎、抗病毒、抗菌和解热。近年来,清热解毒类中药对内毒素败血症的预防与治疗作用及其内在机制逐渐被发掘。根据前期研究报道,板蓝根氯仿提取物及甲醇提取物具有抗内毒素作用,而临床应用中板蓝根主要以水溶性成分为药效物质基础。因此,本研究旨在研究板蓝根水提取物的抗内毒素败血症作用,并探讨其可能的药理分子机制。方法:本文采用人宫颈癌He La细胞及小鼠腹腔单核巨噬细胞RAW264.7,分别进行板蓝根水提取物的体外活性及药效机制研究。在体内实验中,采用板蓝根水提取物对LPS诱导的内毒素休克模型小鼠的保护作用进行药效评价,实验中板蓝根水提取物给予临床等效剂量,以小鼠生存率(%)作为评价指标。采用实时荧光定量聚合酶链式反应(q-PCR)技术及酶联免疫吸附实验(ELISA)进行机制研究,分别测定核转录因子-κB(NF-κB)下游细胞因子肿瘤坏死因子-a(TNF-a)和白细胞介素-1β(IL-1β)的释放及过表达;干扰素TIR结构域衔接蛋白(TRIF)激酶下游干扰素调节因子3(IRF3)的调控基因干扰素-β(IFN-β)和及其诱导基因的释放及过表达。结果:板蓝根水提取物可显著提高LPS诱导的内毒素败血症小鼠的生存率:LPS模型组小鼠2 d内全部死亡;板蓝根水提取物预防给药组小鼠生存率达80%以上,并可有效减缓LPS诱导内毒素小鼠的体温下降趋势;减少肝脏炎性细胞浸润和肺组织的损伤,显著抑制肝、肺组织中炎症因子Nos2、IL-6 m RNA的过表达。机制研究结果表明,板蓝根水提取物仅在4 h时间点对TNF-a和IL-1βm RNA的表达有抑制作用,而1 h和8 h时间点均无显著抑制作用。通过测定不同时间点内毒素模型小鼠体内IRF3下游基因IFN-β的表达和释放及其诱导基因的表达,结果表明,板蓝根水提取物在不同时间点对IFN-βm RNA表达和蛋白的释放有显著的抑制作用,并对其诱导基因CXCL9、CXCL10、CXCL11 m RNA的表达具有显著抑制作用。此外,体外实验测定板蓝根水提取物对NF-κB活性物及对LPS诱导RAW264.9细胞基因表达的影响与体内实验结果一致。结论:板蓝根水提取物对LPS诱导内毒素小鼠具有保护作用,其调控IRF3下游炎症指标IFN-β的转录水平及释放,并阻断IFN-β/STAT干扰素信号传导通路,抑制其下游促炎细胞因子CXCL9、CXCL10、CXCL11的转录表达,从而发挥保护小鼠脏器组织,减缓内毒素引起的机体损伤。本研究揭示了板蓝根抗内毒素作用及中医清热解毒的机理,对板蓝根临床用药指导具有重大意义。