【摘 要】
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本试验以刺山柑果实为研究材料,通过有机溶剂萃取物法得到:石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取物。借助体外抑菌及抗氧化实验,筛选活性较好的刺山柑萃取物,采用HPLC色谱技术对刺山柑萃取物中的芦丁、对羟基苯甲酸及异槲皮苷进行定性、定量分析。同时利用不同浓度的刺山柑正丁醇萃取物分别干预MH7A细胞,采用CCK-8比色法检测MH7A细胞的增殖状况,流式细胞术检测MH7A细胞的凋亡情况。此外,通过建立牛Ⅱ型胶原诱导型关节炎(CIA)大鼠模型,将60只SD大鼠随机分为:刺山柑正丁醇萃取物高、中、低剂量组,空白组,模型组,阳性
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本试验以刺山柑果实为研究材料,通过有机溶剂萃取物法得到:石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取物。借助体外抑菌及抗氧化实验,筛选活性较好的刺山柑萃取物,采用HPLC色谱技术对刺山柑萃取物中的芦丁、对羟基苯甲酸及异槲皮苷进行定性、定量分析。同时利用不同浓度的刺山柑正丁醇萃取物分别干预MH7A细胞,采用CCK-8比色法检测MH7A细胞的增殖状况,流式细胞术检测MH7A细胞的凋亡情况。此外,通过建立牛Ⅱ型胶原诱导型关节炎(CIA)大鼠模型,将60只SD大鼠随机分为:刺山柑正丁醇萃取物高、中、低剂量组,空白组,模型组,阳性药物组(甲氨蝶呤)。利用蛋白芯片技术测定各组大鼠血清中与RA相关的炎症细胞因子,包括:促炎细胞因子TNF-α、IFN-γ、IL-1β、IL-1α、MCP-1、IL-2、IL-6,抑炎细胞因子:IL-13、IL-10、IL-4,并进行GO富集分析及KEGG信号通路富集分析。主要结果如下:
(1)体外抑菌及抗氧化实验结果表明:刺山柑乙酸乙酯及正丁醇萃取物活性较好。
(2)HPLC分析结果得出:芦丁、对羟基苯甲酸、异槲皮苷分别在0.5~16、1~32、0.5~16μg/mL(r均>0.9990)范围内呈良好的线性关系,精密度、稳定性、重复性试验的RSD值均<2.0%;平均加样回收率在84.81%~101.04%。
(3)利用CCK-8法及流式细胞术检测MH7A细胞增殖与凋亡实验结果表明:刺山柑正丁醇萃取物对MH7A细胞的增殖具有明显抑制作用,并且能够诱导其发生凋亡。
(4)蛋白芯片检测结果显示:刺山柑正丁醇萃取物高、中、低剂量组均能够显著下调模型组中的促炎细胞因子,上调抑炎细胞因子;GO及KEGG富集分析结果显示,与RA相关的炎症细胞因子主要富集于NO生物合成过程的调节、NO代谢过程、活性氧生物合成过程、细胞因子及趋化因子代谢过程、免疫应答分子介体的产生、细胞分泌的正向调节、肿瘤坏死因子受体超家族、IL-2受体、IL-6受体、IL-1受体、JAK/STAT信号通路、IL-17信号通路、细胞因子与细胞因子受体相互作用等过程中。
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