梨果实ACC氧化酶基因克隆的研究

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梨(Pear)属蔷薇科(Rosaceae)梨亚科(Pomaceae)梨属(Pyrus L.)植物,是我国重要的经济树种之一,在我国有着悠久的栽培历史。为解决困扰梨生产已久的果实储藏、保鲜问题,本研究以乙烯是影响梨果实采后衰老、腐烂的主要因素为依据,从影响梨果实内源乙烯合成的ACC氧化酶入手,对ACC氧化酶的基因进行序列分析,以期为日后从遗传基因上改变梨果实采后特性奠定基础,取得了以下成果:1.建立了适合于梨果实总RNA提取的改良CTAB法。在比较热硼酸法、异硫氰酸胍法、CTAB-LiCl法和改良CTAB法提取总RNA效果的基础上,针对梨果肉组织中富含多酚、多糖的特点,在传统CTAB法的基础上增加了去除多酚和多糖的步骤,取得了良好的试验结果,获得了高质量的梨果实总RNA。2.获得三个梨品种ACC氧化酶基因cDNA片断。以雪花梨、黄金梨、茄梨等3种果实为试材,提取并纯化果实总RNA;经反转录合成cDNA:根据ACC氧化酶的氨基酸保守序列翻译成的密码子核苷酸序列,设计合成一对特异引物;经PCR扩增、克隆分别得到三种梨果实的三条基因片断。3.对获得的基因片断进行亚克隆,经测序获得三个梨品种的ACC氧化酶基因序列;通序列比较得知研究获得的三个基因片断与已知其它梨品种ACC氧化酶基因的同源性均在98%以上,证实本研究得到的基因片断为ACC氧化酶基因的一部分。
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