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目的:垂体腺瘤在颅内肿瘤的发病率约占10~12%。大部分垂体腺瘤为良性,部分向蝶窦,两侧海绵窦,周围颈内动脉,视神经和下丘脑侵润,甚至有部分呈现远隔转移,复发率高,表现为生物学行为的恶性倾向。关于垂体腺瘤的发生和生物学行为改变的原因尚未清晰,由于肿瘤的发生常常伴随着染色质的改变,因此对垂体腺瘤的DNA倍体和染色体进行研究能增进对垂体腺瘤的认识。 但由于垂体腺瘤体外增殖率低,单细胞悬液的培养和染色体制备有技术上的困难,有效地获得它高质量的染色体一直是个难题。为了摸清体外培养垂体腺瘤细胞以获得一定数量和质量染色体的条件,并研究染色体改变与垂体腺瘤侵袭性的相关性,设计了本次试验。材料和方法:试验以经蝶窦垂体瘤切除手术中取得的新鲜垂体腺瘤组织制作单细胞悬液,并进行分组培养,以不同浓度的秋水仙胺阻滞不同时间,并通过计数MI和各组间的比较统计,获得了稳定地制备一定数量和质量染色体的适当条件,并就此对30例垂体腺瘤进行了R显带,核型分析,同时以间期荧光原位杂交技术(interphase-FISH)检测8,9,11号染色体及流式细胞仪进行DNA倍体检测,结合临床资料,在侵袭性垂体腺瘤和非侵袭性垂体腺瘤之间进行了比较。结果:我们的研究发现:秋水仙胺浓度0.1μg/ml,直接阻滞12h时,得到的垂体腺瘤染色体的数量最多,质量也适合于做核型分析。结合流式细胞仪检测,常规核型分析和荧光原位杂交发现:侵袭性垂体腺瘤DNA倍体呈现向多倍体方向发展的趋势,增值率也有明显提高;染色体数目的变异频率大大高于非侵袭性垂体腺癌。8,9,12,19号染色体的增加在垂体腺瘤染色体变异中十分常见,8,12,19号染色体的变异各型垂体腺瘤中都有发现;9号变异多见于侵袭性垂体腺瘤。间期FISH验证了 垂休捅的染也什改变及儿‘J肿痛侵袭件的相关付叫穴 研究生I0i恒 导帅忍囚帧 核型分析,并且发现了常规核型分析中没有发现的8四体9四体等克隆 性异常,同时证明9,11号染色体的改变多见于侵袭性垂体腺瘤。 结论:通过试验,我们认为秋水仙胺终浓度 0.in g加,阻滞时间 12h为 体外培养垂体腺瘤细胞,获得可供分析,较高质量的染色体的最佳条件。 同时我们认为,如果垂体腺瘤细胞DNA倍体向多倍体发展,增殖率增高, 染色体数目变异增多,标志着垂体腺瘤的侵袭性的增加。8,12,19号染 色体的改变可能在垂体腺瘤的发生起着重要作用,而9和 11号染色体的 改变可能标志着肿瘤侵袭性的增加。间期FISH技术是一项新发展的技术, 它简便,稳定,百观,可以克服核型分析需染色体培养和专业培训等技 术困难和不稳定性,并进一步验证核型分析。它还能够检测特定序列的 改变。流式细胞仪的检测更为迅速,可靠;在实际工作中能通过流式细 胞仪和间期FISH结合,能够方便迅滚地检测染色体变化,判断垂体腺瘤 的侵袭性和预后,以便进一步采取相应治疗措施。