【摘 要】
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背景与目的:NK4不仅具有HGF拮抗剂作用,而且具有抗血管生成作用。本实验在人卵巢癌细胞SKOV-3中转染NK4cDNA片段,研究NK4在裸鼠体内通过NK细胞抑制人卵巢癌的发展。方法:NK4
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背景与目的:NK4不仅具有HGF拮抗剂作用,而且具有抗血管生成作用。本实验在人卵巢癌细胞SKOV-3中转染NK4cDNA片段,研究NK4在裸鼠体内通过NK细胞抑制人卵巢癌的发展。方法:NK4和荧光霉素(Luciferase)表达的质粒分别转染人卵巢癌细胞SKOV-3,稳定转染后,得到实验组SKOV-3/NK4细胞和对照组(SKOV-3/LUC)细胞,再加上之前没有做任何处理的SKOV-3细胞作为空白对照。将上述三种细胞在培养基中培养,进行如下检测:1.分别检测三组细胞培养基中NK4蛋白的表达情况2.将SKOV-3细胞,分别在上述三种细胞(SKOV-3/NK4,SKOV-3/LUC和SKOV-3)的培养基当中培养后,分别检测三组细胞裂解液当中c-Met以及其活化产物p-c-Met的表达情况。3.用三组肿瘤细胞(SKOV-3/NK4、SKOV-3/LUC和SKOV-3)分别注射于裸鼠皮下,建立皮下种植瘤模型,比较三组肿瘤细胞的生长速度。4.将皮下肿瘤结节切除离体,用石蜡包埋、切片、免疫组化、CD49b标记,在显微镜下观察肿瘤组织当中NK细胞的聚集情况并计数统计。结果:在SKOV-3/NK4培养基中有NK4蛋白表达,对照(SKOV-3和SKOV-3/LUC)细胞中无表达。磷酸化-c-Met在SKOV-3/NK4培养基培养的SKOV-3细胞中被抑制,而在对照组SKOV-3和SKOV-3/LUC细胞培养基培养的SKOV-3细胞中正常表达。c-Met表达在三组中无差别。种植7天后SKOV-3/NK4组种植的皮下肿瘤结节生长速度与其余两组相比,较为缓慢(P<0.05),具有统计学差异。SKOV-3/NK4组与SKOV-3/LUC组种植瘤组织石蜡切片经CD49b抗体标识后计数肿瘤组织中NK细胞的个数,SKOV-3/NK4组NK细胞个数明显多于SKOV-3/LUC组(P<0.05)。结论:NK4蛋白在SKOV-3/NK4细胞培养基中大量分泌,NK4能抑制人卵巢癌细胞c-Met受体磷酸化。在裸鼠体内NK4能促进NK细胞聚集从而抑制卵巢癌细胞生长,NK4可作为卵巢恶性肿瘤基因治疗的新成员。
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