目的：如何动员内源性神经干细胞的增殖在缺血性脑损伤治疗中己成为又一个研究重点，而神经细胞干细胞因子(SCF)在内源性神经干细胞的增殖中作为主要的存活刺激因子而存在，对神经干细胞的增殖可能起促进作用。本文重点观察神经细胞SCFmRNA在大鼠脑缺血再灌注损伤后不同时间的表达情况，以及自配康脑液(主要由黄芪、丹参、川芎、葛根、钩藤、三七等组成)干预后，对神经细胞SCFmRNA表达的影响，这种通过药物改善脑血液循环后，对神经细胞SCFmRNA表达规律的研究还未见报道，康脑灵单方剂已明确具有扩张血管、增加血流量，有脑保护作用。应用药物干预旨在探讨在缺血再灌注损伤后通过SCFmRNA表达规律的研究，间接反映在内源性神经干细胞增殖领域的活血化淤药物的应用价值。 材料与方法：本组实验选用雄性SD大鼠36只，以线拴法建立大脑中动脉缺血再灌注模型(MCAO)，随机分为实验组：缺血1.5h再灌注1 d、3d、7d、14d组、药物干预组：(建立同样MCAO模型)，胃饲康脑液2ml(配制)/每日晨一次直至处死、其余步骤与实验组相同。每组4只，假手术组除不插线外，其余步骤同实验组。标本采集：实验组及药物干预组动物在规定时间内取材：分别于缺血1.5h再灌注1d、3d、7d、14d取材；假手术组于手术后1 d取材。大鼠在10％水和氯醛(300mg/kg)麻醉下，经左心室插管至升主动脉，依次灌入生理盐水200ml、4％的多聚甲醛300ml，灌注完毕后开颅，于前囟前2mm至前囟后3mm之间取脑，切块厚度5mm，置入4％的多聚甲醛(含1/5000DEPC)中固定40分钟，蒸馏水浸泡4h.常规梯度乙醇脱水，二甲苯透明，浸蜡，包埋。连续冠状切片，厚度6 μm，粘于多聚赖氨酸处理后的玻片上。37℃烤箱过夜后室温保存。采用原位杂交技术检测脑缺血再灌注后不同时间的SCFmRNA的表达。原位杂交步骤按试剂盒说明进行：1.石蜡切片厚度6 μm。2.采用多聚赖氨酸处理玻片。3.石蜡切片经常规脱蜡至水。4.暴露mRNA核酸片段。5.后固定：胃蛋白酶消化后，室温固定10分钟。6.预杂交：湿盒的准备：干的杂交盒底部加20％甘油20ml以保持湿度。7.杂交：每张切片20 μι杂交液，加在切片上。将原位杂交用盖玻片，盖在切片上。8.杂交后洗涤。 9.滴加封闭液，甩去多余液体，不洗。10.滴加生物素化鼠抗地高辛。11.滴加SABC。 12.滴加生物素化过氧化物酶。13.DAB显色：使用DAB显色试剂盒。14.苏木素复染，充分水洗。15.酒精脱水，二甲苯透明，中性树胶封片。16.原位杂交信号显示：DAB显色，光镜下观察，出现棕黄色颗粒为阳性细胞，位于胞浆。 结果：对脑缺血再灌注后不同时间的皮质区、纹状体区的SCFmRNA阳性细胞计数分析：每400倍光镜视野下：1、假手术组皮质区：10.15±3.50个；纹状体区：14.50±1.61个。 2、实验组：皮质区：第1d：33.20±0.42个，第7d：67.50±3.07个，第14d：31.63±1.31个；纹状体区：第1d：41.34±0.21个，第7d：64.44±4.68个，第14天：36.11±0.50个。实验组表达规律：第1d阳性细胞开始增加，第7d达高峰，第14d下降，神经细胞SCF mRNA的表达均明显高于假手术组，两者有显著性差异(P<0.01)2、药物干预组：皮质区：第1d 30.38±0.46个，第7d：63.24±3.68个。第14d： 30.11±0.42个；纹状体区：第1d 39.38±0.76个，第7d：64.46±4.38个，第14d： 33.71±0.61个。神经细胞SCFmRNA表达与实验组有相同的表达规律，与实验组相比阳性细胞计数无明显统计学差异(p>0.05)。 结论：脑缺血再灌注损伤后，神经细胞SCFmRNA表达增强，表达规律与所报道的神经干细胞的巢蛋白表达规律相似，提示SCF可能对神经干细胞增殖具有促进作用。药物干预后，SCFmRNA表达规律与实验组无明显差异，提示康脑液在改善脑血液循环的同时，对SCFmRNA的表达规律无明显影响。这项结果可能表明，一方面，康脑液能够改善脑血液循环，扩张血管，增加血流量，起到脑保护作用，另一方面，由于对神经细胞SCFmRNA表达无明显影响，间接反映其对内源性神经干细胞的增殖不产生负面影响，在缺血再灌注损伤后的康复治疗中有应用价值。