奶牛乳房炎(bovinemastitis)是危害我国奶牛饲养业重大疾病之一。该病主要是由多种细菌引起，而金黄色葡萄球菌是引起奶牛乳房炎的最主要病原菌。近年研究表明，疫苗接种是预防奶牛乳房炎的有效方法，但是国内对于乳房炎疫苗免疫后抗体水平的评价研究却不多。本研究建立了针对金黄色葡萄球菌抗体检测的间接ELISA方法，并应用ELISA方法对奶牛乳房炎多联灭活疫苗免疫后血清中IgG、IgG1、IgG2水平进行了检测和分析。 本研究应用超声波处理金黄色葡萄球菌855-23株全菌体制备了裂解蛋白抗原，成功建立了检测金黄色葡萄球菌抗体IgG的间接ELISA方法。优化了间接ELISA最适条件，其中抗原包被浓度为8.637μg/mL，37℃包被时间为2h，酶标兔抗牛的IgG工作浓度为1:1000，抗体抗原作用时间为1h。经交叉试验、阻断试验、重复性试验和敏感性试验等证实建立的ELISA重复性好、特异性强、敏感性高。其中板内变异系数0.96％-1.67％，板间变异系数为1.11％-1.84％；包被的裂解抗原与其他乳房炎病原菌无交叉反应，阻断结果为阳性；间接ELISA方法灵敏度是试管凝集试验的50-100倍。 分别检测30份阳性牛血清不同稀释度的OD值，阳性血清OD值与血清中IgG、IgG1、IgG2的ELISA效价倒数的对数之间均存在线性相关性。根据拟和的标准曲线，确定了回归方程，分别为log[ET倒数]=1.2568x+1.564(血清IgG)，log[ET倒数]=2.3327x+1.1584(血清IgG1)，log[ET倒数]=0.8478x+1.5366(血清IgG2)。回归方程的建立为临床免疫后根据血清OD值来预测和分析抗体水平提供了数学模型。 为了评价乳房炎多联灭活疫苗的体液免疫效果，应用建立的间接ELISA方法对不同佐剂乳房炎多联灭活疫苗免疫后的抗体进行检测，结果表明铝胶苗血清IgG、IgG1、IgG2抗体效价均高于其他佐剂苗和进口疫苗，血清IgG2抗体水平高于IgG1。进一步监测铝胶苗免疫后的抗体消长水平，结果，免疫组在二免后，血清特异性抗体水平迅速升高；其中，IgG1在免疫后30d效价最高，IgG、IgG2在免疫后45d效价达到最高峰；在二免后60d，IgG2水平仍高于IgG1。结果表明，乳房炎多联铝胶灭活疫苗免疫后可刺激奶牛产生针对金黄色葡萄球菌的有效体液免疫应答。