【摘 要】
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牛支原体病是由牛支原体引起的一种可导致多种病症的传染病。为了快速准确的诊断该病,本研究在参考国内外文献的基础上,选取OPPD /F作为特异性基因,设计合成引物和探针,建立
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牛支原体病是由牛支原体引起的一种可导致多种病症的传染病。为了快速准确的诊断该病,本研究在参考国内外文献的基础上,选取OPPD /F作为特异性基因,设计合成引物和探针,建立了牛支原体1aqMan实时荧光定量PCR检测方法。目的：本研究旨在建立一种快速检测牛支原体的实时荧光定量PCR检测方法。方法：根据GenBan k中收录的牛支原体OPPD/F基因序列(登录号：AF130119),利用Primer 5.0软件设计特异性引物与TaqMan探针,以重组质粒作为绝对定量的模板,构建检测牛支原体的TaqMan实时荧光定量PCR检测方法。结果：所构建的TaqMan实时荧光定量PCR检测方法线性关系良好,标准曲线的相关系数R2=0.994,扩增效率E=1.28。荧光定量PCR法检测的敏感性是常规PCR的10倍；特异性良好,检测9种相关细菌和病毒均为阴性；重复性好,组内及组间样本检测Ct值均小于2%。结论：牛支原体TaqMan实时荧光定量PCR检测方法较之于常规PCR方法有快速、特异性强、敏感性高、稳定性好的优点。
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