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肺炎性疾病一直以来严重危害养猪业,盐酸多西环素与氟苯尼考因对相关病原菌抗菌活性强、在猪体内药代动力学特征优良被广泛的用于该类疾病的治疗。由于该病常表现为多种病原菌的继发感染和混合感染,临床上单一用药已经难以有效控制,需联合用药以提高疗效和避免耐药菌的产生,而将盐酸多西环素（Doxycycline hydrochloride,DOX）和氟苯尼考（Florfenicol,FF）两者联合应用在增加抗菌谱同时还可以增强抗菌作用,因此开发盐酸多西环素-氟苯尼考复方注射剂的具有重要的临床应用价值。作为一种新的复方注射剂在投放市场前必须进行严格的Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ期临床试验,而靶动物安全性与残留消除是其中的核心研究内容,主要目的是观察靶动物对新药的耐受程度和不良反应,阐明其在动物可食性组织中的残留消除规律,提出休药期标准。本研究按照《VICH兽药靶动物安全性指导原则》以及《兽药残留试验指导原则（征求意见稿）》,开展盐酸多西环素-氟苯尼考复方注射液在猪的安全性和残留消除研究。1. 盐酸多西环素-氟苯尼考复方注射液在猪的安全性研究选取健康三元杂交猪32头,体重19±0.47 kg。适应饲养一周后,随机分为四组,分别为1（8 mg/kg）、3（24 mg/kg）、5（40 mg/kg）倍推荐剂量组和空白对照组,每组8头,肌肉注射给药,一天1次,连续6 d,试验期间观察各组猪的临床表现,并于分别在给药前、停药0 d、停药3 d这三个时间点测定各组猪的血常规和血生化指标,试验结束时对猪进行剖检以及组织切片病理学检查。临床观察发现5倍推荐剂量组（40 mg/kg）的注射部位出现红肿,且发生腹泻,其他试验组均未见任何异常症状。血常规指标检测结果显示,在停药0 d时,5倍推荐剂量组（40 mg/kg）的白细胞（WBC）水平和血红蛋白（HGB）浓度显著低于空白对照组（P<0.05）,当时间延长到停药3 d时,WBC、HGB值均略有回升,此时与空白对照组的差异不显著,除了WBC、HGB外的血常规指标组间差异均不显著（P>0.05）。通过各组血生化指标的对比分析,各剂量组的碱性磷酸酶（ALP）、天冬氨酸转氨酶（AST）、甘油三酯（TG）、肌酐（CREA）、尿素（UREA）、总蛋白（TP）、谷氨酸转氨酶（ALT）、球蛋白（GLB）、乳酸脱氢酶（LDH）、磷（P）、镁离子(Mg2+)、总胆固醇（TC）、钙离子(Ga2+)值与空白对照组相比均无显著差异（P>0.05）;但随着给药剂量的增加,肌酸激酶（CK）、γ-谷氨酰胺转移酶（GGT）和葡萄糖（GLU）水平变化越来越明显,其中5倍推荐剂量组（40 mg/kg）与空白对照组的差异达到显著（P<0.05）。剖检及组织病理学检查结果显示,5倍推荐剂量组（40 mg/kg）的心脏、肝脏、肾脏、肺脏、脾脏等器官组织均未见任何病理变化。结果表明,盐酸多西环素-氟苯尼考复方注射液对猪的血常规和血生化指标均无明显影响,对猪的心脏、肝脏、肾脏、肺脏、脾脏等器官无明显病理学影响。2. 猪可食性组织中同时检测盐酸多西环素、氟苯尼考以及氟苯尼考胺的UPLC-MS/MS方法的建立用0.1%氨化乙腈+Na2EDTA-Mac Ilvaine缓冲液作为提取剂,重复提取两次,提取液于60℃下氮气吹干,初始流动相进行复溶,利用超高效液相色谱串联质谱法（Ultra performance liquid chromatography tandem mass spectrometry,UPLC-MS/MS）进行检测,外标法定量。该方法在10～1000μg/kg的范围内,呈现良好的线性（r>0.99）,检测限（LOD）和定量限（LOQ）分别为5μg/kg和10μg/kg,各组织在LOQ、1/2最大残留限量（1/2MRL）、最大残留限量（MRL）三个浓度的平均添加回收率在66.8%～113.54%之间,总体的批内变异系数小于11.7%,批间变异系数小于9.5%,储备液与工作液可在-20℃下避光保存三个月稳定,组织加标样品在-20℃下避光保存30 d稳定。该方法具有简单、快速、高效等特点,可满足残留分析的要求。3.盐酸多西环素-氟苯尼考复方注射液在猪可食性组织中的残留消除研究选取健康三元杂交猪25头,体重29.0±0.55 kg。适应饲养一周后,随机分为两组,分别为空白对照组（5头）、残留组（20头）,残留组按20 mg/kg剂量肌肉注射盐酸多西环素-氟苯尼考复方注射液,一天1次,连续7 d,分别于给药后的0.5 d、3 d、7 d、14 d、28 d、42 d宰杀一组猪,每组5头,其中空白猪1头,残留猪4头,采集肝、肾、肌肉、脂肪等组织,样品前处理后,经UPLC-MS/MS检测。结果表明:在停药第0.5 d时,除了注射部位外,盐酸多西环素、氟苯尼考均在肾脏中残留浓度最高,浓度分别为10853μg/kg、4591μg/kg,而氟苯尼考胺在肝脏中残留浓度最高,浓度为1550μg/kg;盐酸多西环素在猪肾脏、肝脏、肌肉、皮脂中的消除半衰期分别为4.90 d、5.72 d、6.79 d、5.81 d,氟苯尼考的分别为2.49 d、3.40 d、2.74 d、1.72 d,氟苯尼考胺在肾脏、肝脏、肌肉中的休药期分别为3.89 d、4.41 d、3.62 d,在皮脂中只能检测到两个时间点,无法绘制消除曲线。通过WT1.4软件得出氟苯尼考在肾脏、肝脏、肌肉、皮脂以及注射部位肌肉的休药期分别为14 d、7 d、11 d、5 d以及17 d,盐酸多西环素的分别为30 d、34 d、44 d、21 d以及38 d。综上,建议盐酸多西环素-氟苯尼考复方注射液按20 mg/kg b.w,一天1次、连续7 d给猪肌内注射后,休药期可制定为44d。本论文评价了盐酸多西环素-氟苯尼考复方注射液在猪的安全性,阐明了该复方注射液在猪可食性组织中的残留消除规律,并在此基础上制定了合理的休药期,这些结果为盐酸多西环素-氟苯尼考复方注射液作为三类新兽药报批提供了可靠的数据支持,并对其日后在兽医临床上的应用具有重要指导意义。