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为了建立良好的百合悬浮细胞培养体系,本试验首先研究了其愈伤组织诱导与再生体系,进而建立了3个基因型的5个悬浮细胞系。试验具体研究方法及取得的结果和结论如下:(一)愈伤组织诱导与再生体系研究(1)愈伤组织发生能力的测试:为了选择适宜的基因型和外植体类型,试验选用多个百合基因型的多种外植体(试管鳞茎、田间鳞茎、花器官或种子)为试材,利用激素picloram进行愈伤组织诱导。试验结果表明,愈伤组织发生能力为岷江百合、麝香百合>OT系百合、东方百合、亚洲百合>兰州百合,诱导效果为鳞片>花丝>种子>花柱>花药和子房。但具体到某一基因型或同一基因型的不同外植体其愈伤组织发生能力仍然存在差异。(2)愈伤组织诱导与再生的研究:选用愈伤组织发生能力较强的岷江百合和麝香百合‘白狐’的试管鳞茎为试材。在愈伤组织诱导过程中,岷江百合研究了picloram浓度的影响,‘白狐’研究了光照、起始材料状态及激素种类(picloram和2,4-D)和浓度的影响;在愈伤组织再生过程中,两个基因型均研究了MS中大量元素含量和蔗糖浓度的影响。试验结果表明,岷江百合在picloram 2.0 mg?L-1条件下诱导效果最佳,诱导率约为80%;‘白狐’在picloram 1.0 mg?L-1条件下诱导效果最佳,诱导率约为100%,光照和起始材料状态对愈伤组织诱导的影响不显著;2个品种的最佳再生培养基均为?MS +蔗糖15 g?L-1。(3)愈伤组织的再生:将生长良好的愈伤组织接种到培养基?MS+蔗糖15 g?L-1上进行植株再生,试验结果表明,基因型和愈伤组织类型在愈伤组织再生中起着重要作用。在基因型相同的条件下,愈伤组织的再生能力主要与愈伤组织类型有关。胚性愈伤组织的再生能力强,再生率基本为100%,非胚性愈伤组织的再生能力差,再生率偏低。(二)悬浮细胞系建立与植株再生的研究在(一)中选用生长良好且可成功再生的愈伤组织接种到培养液MS(NH4NO3含量减半)+2.0mg?L-1 picloram+30g?L-1蔗糖,置于25℃恒温摇床上,100 r·min-1、黑暗条件下进行悬浮培养。悬浮细胞在再生培养基?MS+15 g?L-1蔗糖上进行植株再生。试验结果表明,各悬浮细胞系的状态和再生情况与其起始愈伤组织的状态和再生情况相对应。结构松散的愈伤组织其悬浮细胞系的建立时间短,分散度、均一度和生长速率高,但由于为非胚性愈伤组织,其悬浮细胞系的再生率也偏低;颗粒状、结构紧实的愈伤组织其悬浮细胞系的建立时间长,分散度、均一度和生长速率均低于前者,但由于为胚性愈伤组织,其悬浮细胞系的再生能力强,再生率为100%。