背景:当今社会周围神经损伤的发生率特别高,对于缺损长度超过2cm的损伤目前尚无理想的解决办法,近些年生物工程学的发展和干细胞研究深入开展给神经损伤的治疗带来新希望。种子细胞即许旺细胞一直是研究的“瓶颈”,自体及异体的许旺细胞因其自身的缺点未能得到大规模使用,由干细胞体外诱导而来的类许旺细胞具有广阔的应用前景,如何证明所诱导的类许旺细胞具有许旺细胞的功能至关重要,许旺细胞具有强大的自分泌和旁分泌功能,这可能是其发挥生物学效应的机制之一,因此如能证明所诱导的类许旺细胞可以分泌真正许旺细胞分泌的一些功能性蛋白,则可以为后期的进一步研究提供实验理论依据。目的:分别收集人脐血间充质干细胞、由干细胞诱导分化而来的类许旺细胞以及人引产胎儿来源的许旺细胞的细胞培养上清液,提取其中的蛋白,运用双向电泳技术比较三种细胞的分泌蛋白差异性及相似性,查询相关蛋白的主要功能。方法:按照本课题组之前使用的先用羟乙基淀粉沉淀红细胞,再运用人淋巴细胞分离液离心提取原代间充质干细胞,通过形态学和流式细胞仪测定细胞表面标志物等方法鉴定和测定其纯度,符合要求者进行下一步实验,取第三代干细胞采用本课题组之前优化的诱导方法进行体外人工诱导。采用酶消化法制备人许旺细胞。对三种细胞(间充质干细胞,类许旺细胞,许旺细胞)采用“逐步过度法”过度到无血清培养,收集三种细胞培养上清液,用0.22um滤器过滤去除残留细胞,加入1mM浓度的蛋白酶抑制剂后放入超低温冰箱(-80℃)备用。提取培养液里的分泌蛋白,运用双向电泳和质谱分析技术寻找差异显著蛋白,对间充质干细胞比许旺细胞少的蛋白和类许旺细胞比间充质干细胞多的蛋白进行匹配,查询其蛋白的主要功能。结果:1)2-D凝胶电泳图具有较好的分辨率及重复性,平均每张胶的蛋白表达点有三千左右,匹配率各自是96%、97%、98%。2)诱导前的HUCBMSCs与SCs有397个蛋白差异点,诱导后的类SCs与SCs仅有280个差异蛋白点,说明间充质干细胞诱导为类许旺细胞后在分泌蛋白组学方面更相似于许旺细胞3)对于按照筛选标准筛选出的12个差异蛋白进行质谱鉴定,最终鉴定出7个蛋白(剩下五个因蛋白浓度较低无法成功鉴定出来)4)鉴定出的上述分泌蛋白经查文献得知大部分对神经损伤的修复具有一定的促进作用。结论:1.使用羟乙基淀粉和人淋巴细胞分离液可提取原代的间充质干细胞。2.人脐血间充质干细胞诱导后在分泌蛋白方面更接近真正的许旺细胞。3.本实验成功鉴定出间充质干细胞在诱导分化为类许旺细胞的过程中增加的7个分泌蛋白点,且这些分泌蛋白也是许旺细胞所分泌的。这些分泌蛋白进一步证明了所诱导的类许旺细胞和正常的许旺细胞在分泌蛋白组学方面具有一定的相似性,但同时还存在一定的差距,诱导方案还需要进一步完善。