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本论文以Wistar大鼠脾脏T淋巴细胞为研究对象,利用MTT法检测T淋巴细胞的增殖;利用单细胞钙离子成像分析系统检测单细胞内自由钙离子浓度([Ca2+]i)的动态变化;对中药大黄的主要成分大黄酸(Rhein)和芦荟大黄素(Aloe-emodin)影响白介素2(IL-2)刺激T淋巴细胞增殖的作用特征和机制进行了研究。
结果表明:胞外IL-2可诱导T淋巴细胞增殖,并呈剂量依赖性,且浓度为250U/mL的IL-2对T淋巴细胞的增殖效果最明显,可达46.4%。IL-2引起细胞内[ca2+]i曲线的特征为:加药后一段时间后,[Ca2+]i会迅速上升,之后维持个平台,约为基础值的2.45倍,并且[Ca2+]i不会回落到基础值。进一步的研究表明,IL-2引起的钙升高由细胞内钙释放和细胞外钙内流组成。
通过MTT比色法实验证明,大黄酸和芦荟大黄素对IL-2引起的大鼠T淋巴细胞增殖具有抑制作用:1,10,100μM浓度的大黄酸对T细胞增殖的抑制率分别为27.4%,43.4%和50。5%;0.1,1,10μM芦荟大黄素对T细胞增殖的抑制率分别为31.6%,39.0%和67.9%。作为阳性对照,1,5,10 μM环孢霉素A对T细胞增殖的抑制率分别为28.2%,34.6%和47.9%。
细胞内钙检测的实验表明:大黄酸和芦荟大黄素对IL-2引起的钙升高均有抑制作用:在胞外有钙的条件下,浓度为1,10,100μM的大黄酸对IL-2引起的钙升高的抑制率分别为:40.3%,91.0%和97.6%;浓度为0.1,1,10μM的芦荟大黄素抑制率分别为:28.5%,75.6%和97.2%。
在胞外无钙的条件下,浓度为1,10,100μM的大黄酸作用后的T细胞,受IL-2刺激,抑制率分别为:66.9%,87.6%和96.7%;浓度为0.1,1,10μM的芦荟大黄素受。IL-2刺激,抑制率分别为:46.4%,95.5%和97.8%。
以上结果表明:芦荟大黄素和大黄酸对IL-2引起的T细胞的增殖均有抑制效果,且这种抑制效果与对T细胞[ca2+]i的抑制有关。两种药物都是通过阻断T细胞的胞内钙释放和胞外钙内流两种途径来抑制[Ca2+]i的。