左、右归丸及其拆方对PMOP大鼠下丘脑—垂体—肾上腺轴的调控机制

来源 :辽宁中医药大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:jill_bai
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目的:本研究基于中医学“阴阳互济”理论,以下丘脑-垂体-肾上腺轴为切入点,检测左、右归丸及其拆方对去卵巢大鼠下丘脑、肾上腺TGF-β1、PKA蛋白表达的影响,对绝经后骨质疏松症模型HPA轴的失衡进行解析,从多系统联动角度寻找中医药防治PMOP中“左归丸补其形损,右归丸固其气化”的实验依据。材料与方法:SPF级雌性未生育2月龄SD大鼠95只,体重200220g,按体重采用分层随机分组方法分为正常对照10只,假手术组10只,去卵巢组75只。模型组大鼠手术切除双侧卵巢组织,制备PMOP模型,假手术组大鼠手术切除双侧卵巢组织周围等体积脂肪组织。造模7d后,将术后存活者(70只)按体重分层随机分为7组,最后90只大鼠共分为9组,即正常(Control)组,假手术(SHAM)组,模型(OVX)组,补佳乐(BJL)组,左归丸(ZGW)组,右归丸(YGW)组,共同药(GTY)组,滋阴药(ZYY)组,补阳药(BYY)组,每组10只。分组后开始给药治疗,按每公斤大鼠给药量为人的6.3倍计算,中药自制成生药量为1g﹒ml-1水煎剂,阳性对照药戊酸雌二醇片(补佳乐)碾成粉末,溶入蒸馏水中搅拌均匀制成混悬液,各治疗组灌服对应药物,Control组、SHAM组和OVX组均灌服等体积(2ml)的蒸馏水,灌胃饲养期间,每月为大鼠称重1次,并根据称量体重重新调整灌胃量。经过12w中药灌胃干预,除去造模、饲养期间因手术、灌胃等原因死亡的大鼠,最终共纳入84只大鼠,取材检测相应指标。取材前24h大鼠禁食不禁水,末次给药2h后称量体重并做记录,10%水合氯醛腹腔注射麻醉后,腹主动脉取血,静置2h后,1000rpm离心10min,取上层血清,于-80℃冻存,采用放射免疫法检测血清ACTH、COR含量;取大鼠腰椎,剔除骨骼上附着的软组织,用生理盐水浸润的纱布包裹,于-80℃冻存,采用双能X线骨密度检测仪监测大鼠腰椎骨密度;取大鼠下丘脑和肾上腺,于-80℃冻存,用蛋白印迹法分别检测TGF-β1、PKA蛋白的表达。结果:1.左、右归丸及其拆方对去卵巢大鼠腰椎骨密度的影响各组大鼠腰椎骨密度检测结果如下:给药治疗12w后,与Control组比较,SHAM组、BJL组和ZGW组骨密度相当,无显著性差异(P>0.05),OVX组、YGW组及拆方组骨密度降低,差异极显著(P<0.01);与OVX组比较,各用药组的骨密度均有所提高,差异极显著(P<0.01);与BJL组比较,ZGW组骨密度相当,无显著性差异(P>0.05),YGW组及拆方组骨密度降低,差异极显著(P<0.01);与ZGW组比较,YGW组及拆方组骨密度升高不及左归丸组,差异极显著(P<0.01)。2.左、右归丸及其拆方对去卵巢大鼠血清COR、ACTH的影响各组大鼠血清COR的检测结果如下:与Control组比较,SHAM组、YGW组及BYY组血清COR含量相当,无显著性差异(P>0.05),OVX组、BJL组、ZGW组、GTY组、ZYY组COR含量降低,差异显著(P<0.05);与OVX组比较,各给药组血清COR含量升高,差异显著(P<0.05);与BJL组比较,YGW组、BYY组血清COR含量升高,差异显著(P<0.05),ZGW组、GTY组、ZYY组无显著性差异(P>0.05);与ZGW组比较,YGW组、BYY组血清COR含量升高,差异显著(P<0.05),ZGW组、GTY组、ZYY组无显著性差异(P>0.05)。各组大鼠血清ACTH的检测结果如下:与Control组比较,SHAM组、YGW组及BYY组血清ACTH含量相当,无显著性差异(P>0.05),OVX组、BJL组、ZGW组、GTY组、ZYY组ACTH含量降低,差异显著(P<0.05);与OVX组比较,BJL组、GTY组、ZYY组ACTH含量无显著性差异(P>0.05),ZGW组、YGW组、BYY组ACTH含量升高,差异显著(P<0.05);与BJL组比较,各中药干预组ACTH无显著性差异(P>0.05);与ZGW组比较,GTY组血清ACTH含量降低,差异显著(P<0.05),YGW组、ZYY组、BYY组无显著性差异(P>0.05)。3.左、右归丸及其拆方对去卵巢大鼠肾上腺TGF-β1、PKA蛋白表达的影响各组大鼠肾上腺组织TGF-β1蛋白表达检测结果如下:与Control组比较,SHAM组、BJL组、ZGW组、YGW组、ZYY组、BYY组肾上腺TGF-β1蛋白表达无显著性差异(P>0.05),OVX组、GTY组表达升高,差异显著(P<0.05);与OVX组比较,GTY组无显著性差异(P>0.05),其余各组均低表达,差异显著(P<0.05);与BJL组比较,GTY组升高,差异显著(P<0.05),其余各组无显著性差异(P>0.05);与ZGW组比较,GTY组升高,差异显著(P<0.05),其余各组无显著性差异(P>0.05)。各组大鼠肾上腺组织PKA蛋白表达检测结果如下:与Control组比较,SHAM组及各给药组无显著性差异(P>0.05),OVX组肾上腺PKA蛋白表达下调,差异显著(P<0.05);与OVX组比较,各给药组肾上腺PKA蛋白表达上调,差异显著(P<0.05);与BJL组比较,各中药干预组无显著性差异(P>0.05);与ZGW组比较,YGW组及各拆方组无显著性差异(P>0.05)。4.左、右归丸及其拆方对去卵巢大鼠下丘脑TGF-β1、PKA蛋白表达的影响各组大鼠下丘脑组织TGF-β1蛋白表达检测结果如下:与Control组比较,SHAM组、BJL组、ZGW组、YGW组、ZYY组、BYY组肾上腺TGF-β1蛋白表达无显著性差异(P>0.05),OVX组、GTY组表达升高,差异显著(P<0.05);与OVX组比较,GTY组无显著性差异(P>0.05),其余各组均低表达,差异显著(P<0.05);与BJL组比较,GTY组升高,差异显著(P<0.05),其余各组无显著性差异(P>0.05);与ZGW组比较,GTY组升高,差异显著(P<0.05),其余各组无显著性差异(P>0.05)。各组大鼠下丘脑组织PKA蛋白表达无显著性差异(P>0.05)。结论:1.切除大鼠双侧卵巢后,骨密度显著降低,能较好模拟绝经后骨质疏松症疾病模型。同时该模型伴随HPA轴稳态的破坏,血清ACTH、COR含量降低,这是绝经后骨质疏松症模型的病理状态之一,也可能是骨丢失过程中机体继发的一种病理反应。2.“从阳引阴”的左归丸对于BMD的改善效果最佳。“从阴引阳”的右归丸对于HPA轴的矫正更接近正常组,这可能是“左归丸补形损,右归丸固气化”的佐证。3.左、右归丸及其拆方能够抑制去卵巢大鼠下丘脑及肾上腺组织中TGF-β1蛋白的过分表达,改善肾上腺组织PKA蛋白的抑制状态。这可能是左、右归丸改善PMOP大鼠HPA轴功能的机制之一。
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