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黄嘌呤氧化酶(EC:1.2.3.2)是人体内核酸分解的关键酶,它催化黄嘌呤和次黄嘌呤生成尿酸,同时释放超氧根阴离子和过氧化物。人体内尿酸水平过高会引发高尿酸血症并导致痛风,而过氧化物在人体内积累会引发肿瘤、衰老和心血管疾病。因此,近年来对黄嘌呤氧化酶抑制剂的研究受到人们广泛关注。但是,目前临床应用的黄嘌呤氧化酶抑制药物存在严重的副作用,因此,从天然藻类中寻找具有高效抑制活性的黄嘌呤氧化酶抑制剂成为新的研究方向。本文通过正交试验和单因素实验确定了孔石莼和真江蓠乙醇提取物的最佳浸提条件;测定了孔石莼和真江蓠乙酸乙酯组分和水相组分对黄嘌呤氧化酶(Xanthine Oxdase,XO)的半抑制浓度;动力学分析测定了孔石莼和真江蓠水相组分的抑制机理、抑制类型和抑制常数;分别测定了两种藻类的水相组分与别嘌呤醇的联合抑制作用;实验测定了两种藻类水相组分对自由基的清除作用,并分析了提取物中可能存在的有效化学成分;用氧嗪酸钾盐腹腔注射小鼠建立高尿酸血症模型,并测定了真江蓠水相组分对高尿酸血症小鼠血尿酸水平的影响。具体研究内容和实验结果如下:实验用正交试验法优化了两种藻类乙醇提取物的浸提条件:真江蓠的最佳浸提条件为:浸提时间3h,浸提温度55℃,乙醇浓度70%,料液比1:16。孔石莼最佳浸提条件为:浸提时间4.5h,浸提温度65℃,乙醇浓度90%,料液比1:8。实验用乙酸乙酯分别萃取两种藻类乙醇提取物得到乙酸乙酯组分和水相组分,测得两种藻类水相组分具有较高的抑制活性,其IC50分别为0.58mg/mL和0.32mg/mL,乙酸乙酯组分对XO的IC50分别为7.74mg/mL和0.72mg/mL。实验对水相组分进行动力学研究,测得孔石莼水相组分对XO抑制类型为反竞争性可逆抑制,KIS为0.40;真江蓠水相组分对XO抑制类型为竞争性可逆抑制,KI为0.84;用共毒系数法测定了两种藻类水相组分和别嘌呤醇的联合抑制作用。孔石莼水相组分和别嘌呤醇的共毒系数为16.2,属于弱协同作用。真江蓠水相组分和别嘌呤醇的共毒系数为14.6,属于弱拮抗作用。两种藻类的水相组分对·OH和O2的清除作用,结果显示,两种藻类都对·OH有良好的清除作用,对O2无清除作用。实验还对两种藻类水相组分的化学成分进行了研究,发现两种藻类水相组分中都含有糖和苷类、多肽和蛋白质类以及生物碱类成分。实验采用氧嗪酸钾盐建立小鼠高尿酸模型,测定了真江蓠水相组分对高尿酸血症小鼠血尿酸水平的影响,结果显示,真江蓠高剂量组可显著降低小鼠体内尿酸水平(P<0.05),同时实验过程中小鼠体重未见明显变化。综上所述,孔石莼和真江蓠作为一种沿海常见藻类,含有丰富的营养成分和药用成分,并且安全、无毒副作用,对XO具有较高的抑制活性,因此,孔石莼和真江蓠水相组分具有很好的开发前景,并有望成为抗高尿酸血症药物的研发材料。