传染病是一类由各种病原体引起的具有传染性和流行性的疾病。病毒和细菌是引起多数传染病的主要病原体。基于Taq Man探针的实时荧光定量PCR(q PCR)常用于病毒和细菌的诊断或定量。具有高变异特性的病毒(尤其是RNA病毒)限制q PCR扩增的检测能力和效率。此外,随着细菌对临床常用抗生素的耐药性日益增加,多重耐药细菌不断增多,传统q PCR难以实现单管对多个耐药基因同时检测。基于上述问题,本研究分别建立了两种q PCR检测方法,主要研究内容如下:(1)RSV耐错配型q PCR检测方法的构建呼吸道合胞病毒(Respiratory syncytial virus,RSV)是导致婴幼儿急性呼吸道感染的主要病毒病原体之一。RSV感染的及时诊断,对治疗和预防RSV感染很重要。本部分基于高保真DNA聚合酶的3’-5’外切酶特性,建立了一种新型耐错配的q PCR,并应用于RSV的检测,与传统q PCR相比,该法对突变体的扩增效率更高并具有良好的灵敏度和特异性,检测限可达1.8 PFU/m L。该法对80%RSV阳性样品检测的Ct值相对较低,通过对这些样本进行测序分析发现,样本与引物3’端有错配,证明对错配的良好容忍度,且与商用RSV检测试剂盒检测结果相一致。实验结果表明本文建立的耐错配型q PCR技术可用于检测高变异病毒。(2)细菌耐药基因的二维多重q PCR检测方法的构建头孢菌素和碳青霉烯类抗生素的广泛使多重耐药革兰氏阴性菌数量显著增长,快速检测细菌的多个耐药基因,对治疗多重耐药菌的感染至关重要。本部分通过结合探针荧光基团颜色和扩增产物Tm值,建立了一种单管二维多重q PCR,能快速对多个细菌耐药基因进行分子诊断。通过检测5个碳青霉烯酶基因(即KPC,NDM,VIM,OXA-48和GES)和4个头孢菌素酶(Amp C酶)基因(即CIT,EBC,ACC和DHA)验证了反应原理。该方法特异性良好,灵敏度范围为每个反应30到3000个拷贝。对于共存基因,该方法也能很好进行区分,且结果与单重q PCR具有一致性。建立的二维多重q PCR,具有简单、快速、灵敏及特异的特点,可能成为监测细菌耐药性的有力工具。