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7,8-二羟基黄酮(7,8-dihydroxyflavone,7,8-DHF)是新发现的脑源性神经营养因子Tr KB受体的激动剂,具有强大的神经保护和营养作用。我们前期的研究发现:在缺乏Trk B受体的PC12细胞,7,8-DHF对6-羟基多巴胺(6-hydroxyl dopamine,6-OHDA)损伤的PC12细胞具有明显的保护作用,该作用与7,8-DHF的抗氧化特性密切相关,但是相关的抗氧化通路未完全阐明。Nrf2/HO-1信号通路是细胞对抗氧化应激损伤的重要机制之一,本研究利用6-OHDA诱导的PC12细胞损伤模型,进一步验证了7,8-DHF的保护作用可能和激活Nrf2/HO-1信号通路有关。实验结果如下:1.7,8-DHF(1、5、25μM)预处理6 h对6-OHDA(100μM,24 h)损伤的PC12细胞具有明显的保护作用。7,8-DHF(25μM)使细胞存活率升至86.5%,和6-OHDA组(47.2%)比较差异显著(P<0.01)。后续实验中,6-OHDA和7,8-DHF浓度分别为100μM和25μM。2.6-OHDA处理PC12细胞6 h后,细胞内活性氧(ROS)产量增加至对照组的2.97倍(P<0.01)。7,8-DHF预处理可明显抑制6-OHDA诱导的ROS升高(P<0.05)。3.单独用6-OHDA处理细胞24 h后,GSSG含量达到对照组1.86倍(P<0.01),而以7,8-DHF预处理能有效抑制6-OHDA诱导的GSSG升高(P<0.01)。4.7,8-DHF和PC12细胞孵育不同时间(1、3、6、12、24 h)并不影响全细胞Nrf2的蛋白表达,但在6-24 h时间点上调了HO-1的表达(P<0.01)。5.Nrf2是通过移位至细胞核来调节下游基因的表达。因此,我们又观察了7,8-DHF对Nrf2核转位的影响。7,8-DHF处理3或6 h后,细胞浆Nrf2蛋白水平下降(P<0.01)而细胞核Nrf2含量增加(P<0.05),提示7,8-DHF能促进Nrf2的核转位。6.为观察PI3K/Akt对Nrf2/HO-1的调控作用,我们观察了7,8-DHF对p-Akt和HO-1表达的影响。7,8-DHF处理细胞3-6 h均显著增加p-Akt的蛋白水平(P<0.05-0.01)。而应用PI3K抑制剂LY294002(10μM)预处理后,7,8-DHF上调HO-1的作用部分被抑制(P<0.01)。7.7,8-DHF处理细胞0-6 h,p-ERK1/2表达量明显增加(P<0.05-0.01)。当用MEK抑制剂PD98059(20μM)阻断后,7,8-DHF诱导的HO-1表达被抑制(P<0.01),提示ERK1/2信号通路也能在上游激活Nrf2/HO-1通路。8.MTT实验中,分别以HO-1抑制剂Zn PP(5μM)、LY294002(10μM)以及PD98059(20μM)预处理后,7,8-DHF的保护作用均减弱(P<0.05),提示Nrf2/HO-1、Akt及ERK1/2多条信号通路参与7,8-DHF的保护作用。综上所述,7,8-DHF对6-OHDA诱导的PC12细胞损伤具有明显的保护作用,该作用可能和激活Nrf2/HO-1通路相关。7,8-DHF可促进Nrf2核转位从而上调重要的抗氧化酶HO-1,后者能够分解血红素产生胆绿素、CO和铁离子,从而对抗6-OHDA诱导的氧化应激损伤。此外,7,8-DHF激活Nrf2/HO-1的效应可能通过调节上游的PI3K/Akt和ERK1/2信号通路所中介。