目的:研究不同分子量丝素蛋白对人永生化表皮细胞的增殖作用、紫外防护作用和对大鼠的UVB防护作用。方法:1. 将提取出来的丝素蛋白依据正交试验分组出来的不同条件用碱性蛋白酶降解,得出不同分子量的丝素蛋白;2. MTT法检测UVB对Ha Ca T细胞的损伤实验的最佳剂量;MTT法检测丝素蛋白对Ha Ca T细胞增殖的最佳浓度;3. MTT法检测不同组丝素蛋白对Ha Ca T细胞的增殖影响。4. 建立Ha Ca T细胞UVB损伤模型。将Ha Ca T细胞以1×10~4个/cm~2的密度接种于培养板上,当细胞生长到密度为70%以上时(约72 h),将培养板取出,以备实验检测,辐射剂量为130m J/cm~2(1.97m W/cm~2,66s)。5. 不同分子量组丝素蛋白对Ha Ca T细胞UVB损伤修复的影响细胞实验分七组:Control组、Damage组、SF组、MW1<3000Da组、MW=3.0×10~4Da组、MW12<3000 Da组、MW=8.0×10~3Da组;其中SF组为未降解的丝素蛋白组、后四组为降解后不同分子量(molecular weight)的丝素蛋白组。(1)MTT法检测不同分子量组丝素蛋白对Ha Ca T细胞UVB损伤修复的影响。(2)Hoechst33342染色检测不同分子量组丝素蛋白对Ha Ca T细胞UVB损伤修复的形态学凋亡的影响。(3)流式细胞仪检测不同分子量组丝素蛋白对Ha Ca T细胞UVB损伤修复的凋亡的影响。(4)不同组丝素蛋白对Ha Ca T细胞的谷胱甘肽(GSH)、乳酸脱氢酶(LDH)水平的影响。6. 不同分子量组丝素蛋白对大鼠的UVB防护作用(1)建立大鼠UVB损伤模型和分组将40只SD大鼠的背部皮肤以脊椎处为中线剪除表面4 cm×4 cm大小面积的毛发,继续饲养24小时。将背部无毛部分皮肤划分为2 cm×2 cm四个部分,随机分为8组:Control组、Damage组、Base组、SF组、MW1<3000 Da组、MW=3.0×10~4Da组、MW12<3000 Da组、MW=8.0×10~3Da组;其中SF组为未降解的丝素蛋白组、Base组为不含丝素蛋白的基质的基质组、后四组为降解后不同分子量(molecular weight)的丝素蛋白组。Control组继续饲养不用UVB辐射。Damage组SD大鼠2%戊巴比妥钠腹腔注射(0.2 ml/100 g)麻醉后直接给予200m J/cm~2(1.97m W/cm~2,102s)剂量UVB辐射。Base组和给药组SD大鼠麻醉后固定在大鼠解剖板上,背部每个2 cm×2 cm部分抹上各组药品,药品作用30 min后给予200m J/cm~2(1.97m W/cm~2,102s)剂量UVB辐射,然后继续饲养24 h后予以断颈处死,取实验区域1 cm~2皮肤以备实验检测。(2)通过HE染色观察药物对大鼠的UVB的防护作用。(3)不同组丝素蛋白对大鼠的谷胱甘肽(GSH)、乳酸脱氢酶(LDH)水平的影响。结果:1.不同分子量丝素蛋白对人永生化表皮细胞(Ha Ca T细胞)的增殖作用及紫外防护作用(1)UVB对Ha Ca T细胞的损伤实验的最佳剂量为量130 mj/cm~2。(2)丝素蛋白对Ha Ca T细胞增殖的最佳浓度为1%。(3)不同分子量丝素蛋白均能促进Ha Ca T细胞的增殖活性。其中MW1<3000 Da组效果最强。2.不同分子量组丝素蛋白对Ha Ca T细胞UVB损伤修复的影响(1)不同分子量丝素蛋白可以显著降低UVB辐射对Ha Ca T细胞活性的抑制。(2)不同分子量丝素蛋白可以显著抑制Ha Ca T细胞的凋亡。(3)不同分子量丝素蛋白可以升高由UVB辐射引起的GSH水平降低、可以减少由UVB辐射引起的减少LDH含量增加。3.研究不同分子量丝素蛋白对大鼠的UVB防护作用(1)HE染色法观察得出不同分子量丝素蛋白具有抑制UVB辐射导致的大鼠皮肤紫外损伤的作用。(2)不同分子量丝素蛋白可以升高由UVB辐射引起的GSH水平降低、可以减少由UVB辐射引起的LDH含量增加。结论:1.不同分子量丝素蛋白具有显著地紫外线防护和表皮细胞增殖作用。其中分子量小于3000 Da者效果最为显著。2.体外和在体研究表明,不同分子量丝素蛋白可能通过其抗氧化活性抑制UVB辐射引起的氧化应激,炎症反应,细胞凋亡。3.不同分子量丝素蛋白具有显著的皮肤抗光老化的作用。