目的:通过基因分型方法准确鉴定醋酸钙-鲍曼不动杆菌复合群中的鲍曼不动杆菌;通过聚合酶链式反应(PCR)检测β-内酰胺酶相关耐药基因,探讨耐头孢哌酮/舒巴坦鲍曼不动杆菌β-内酰胺酶基因分布特点;利用MALDI-TOF MS技术对重点科室耐药菌和主要的耐药基因共表达型进行同源性分析,探究重点科室细菌流行特点及MALDI-TOF MS技术在同源性研究中的应用价值。方法:收集2018年1月至2019年6月我院微生物室采用VITEK 2 Compact全自动微生物系统初步鉴定的醋酸钙-鲍曼不动杆菌复合群共255株,仪器药敏试验结合纸片琼脂扩散法(K-B法)筛选出160株对头孢哌酮/舒巴坦耐药的醋酸钙-鲍曼不动杆菌复合群;采用recA、ITS基因分型方法鉴定鲍曼不动杆菌;聚合酶链式反应检测β-内酰胺酶相关耐药基因,包括A类(ESBLs类)GES、TEM,B类(金属酶类)IMP、VIM、DNM,D 类(苯唑西林酶类)OXA-51、OXA-23、OXA-24、OXA-58;利用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)对神经外科和ICU部分耐药菌进行同源性分析,同时对耐药基因OXA-51、TEM和OXA-23共表达型进行聚类分析。结果:经recA、ITS基因分型方法从160株耐头孢哌酮/舒巴坦醋酸钙-鲍曼不动杆菌复合群中鉴定出157株鲍曼不动杆菌。药敏分析发现对头孢哌酮/舒巴坦耐药的鲍曼不动杆菌对临床多种药物耐药,亚胺培南、头孢他啶耐药率99.4%,阿米卡星、庆大霉素、妥布霉素耐药率超过70%,米诺环素耐药率45.2%。目前,替加环素较为敏感,耐药率仅为5.7%。β-内酰胺酶基因检出率:OXA-51 100%、TEM 98.7%、OXA-23 93.6%、GES 53.5%、VIM 47.8%、IMP 17.8%、OXA-58 16.6%,未检出 NDM、OXA-24基因。共有11种耐药基因组合型,其中以耐药基因组合A为主,OXA-51、TEM和OXA-23共表达(n=62,39.74%)。随机选取23株神经外科耐药菌,MALDI-TOFMS聚类程度大于60%,聚类树状图分为两大簇(Ⅰ型7株,Ⅱ型16株),Ⅱ型又分为四小簇(Ⅱa型5株,Ⅱb型4株,Ⅱc型2株,Ⅱd型5株);随机选取28株ICU耐药菌,聚类程度大于65%,大于神经外科;随机选取14株OXA-51、TEM和OXA-23共表达菌株,聚类分析成同一簇分布。结论:β-内酰胺酶基因OXA-51、TEM和OXA-23共表达模式是我院耐头孢哌酮/舒巴坦鲍曼不动杆菌的主要耐药机制之一;MALDI-TOF MS同源性分析神经外科耐头孢哌酮/舒巴坦鲍曼不动杆菌成簇聚集分布,感染模式为阶段性同型菌株播散,而ICU耐头孢哌酮/舒巴坦鲍曼不动杆菌呈散在分布,遗传亲缘关系较神经外科更近;MALDI-TOFMS技术有望成为分子流行病学研究新型手段。