内分泌干扰物被广泛的使用可能会对人类健康产生严重的危害,因而引起了人们极大的关注。多酚类药物不仅具有抗癌、抗氧化、抗血栓和预防心脏病的功效而且常被用作食品添加剂。通过研究在不同温度下,多酚类化合物与蛋白质的相互作用及其对蛋白质与内分泌干扰物相互作用的影响,可以确定两种配体与蛋白质的作用机制以及两种配体同时存在时的作用关系,将为临床上减弱内分泌干扰物对人体的影响以及食品安全提供有效信息。本课题是在文献调研的基础上,结合本实验室的实际情况,运用一系列光谱方法结合等温滴定量热、差示扫描量热以及分子模拟研究多酚类化合物和双酚F与多种蛋白在不同温度下的相互作用。主要分为以下四部分:第一部分:运用荧光光谱、圆二色光谱和等温滴定量热技术研究白皮杉醇和双酚F与胃蛋白酶在不同温度下的竞争结合,探讨温度对结合常数、焓变、熵变和结合位点数等热力学参数的影响,确定两种配体共同存在时与胃蛋白酶的结合方式。结果表明白皮杉醇结合胃蛋白酶的能力优于双酚F。通过分子对接获得两种配体占据胃蛋白酶的活性口袋的信息。酶活性实验研究表明两种配体对胃蛋白酶活性有抑制作用。第二部分:荧光光谱研究白皮杉醇或双酚F与人血清白蛋白在不同温度的结合机制,结合紫外可见吸收光谱得出猝灭过程为静态猝灭的结论。利用圆二色光谱研究蛋白结合药物前后的构型变化。通过差示扫描量热技术研究得到蛋白质热稳定性变化的信息。利用分子对接技术证实两种配体结合人血清白蛋白IIA位置上以及结合能力的强弱,进一步证明两种配体可能存在竞争的关系。第三部分:通过多种光谱研究白皮杉醇或氧化白藜芦醇在不同温度下与胰蛋白酶的相互作用,从而获得其结合方式以及热力学参数等信息。差示扫描量热和圆二色光谱数据表明蛋白的热稳定性和二级结构发生轻微改变。通过分子对接技术和酶活性实验证实到两种多酚化合物与催化活性氨基酸有相互作用,进而对胰蛋白酶活性产生影响。第四部分:利用荧光光谱结合紫外可见吸收光谱获得白皮杉醇或氧化白藜芦醇与溶菌酶结合是静态猝灭过程并且氢键和范德华力是主要作用力的信息。利用圆二色光谱研究白皮杉醇与氧化白藜芦醇对溶菌酶二级结构的影响。通过分子对接技术研究两种配体结合蛋白的方式以及结合位置,进而可以与酶活性测定结果相互验证。