论文部分内容阅读
雌激素受体(ERα)是一种核受体，调节与雌激素有关的基因转录，在乳腺癌的发生发展过程中具有重要作用，是乳腺癌治疗的靶标和预后的指标。ERα由A、B、C、D、E和F六个结构域组成，含两个转录激活区AF1和AF2。AF1具有雌激素不依赖的转录激活功能，位于A／B区；AF2具有雌激素依赖的转录激活功能，位于E／F区。AF1和AF2的有效转录激活依赖于与其它蛋白质的相互作用。目前，乳腺癌内分泌治疗主要通过降低ERα的转录活性来实现，因此参与调节ERα转录活性的蛋白质的发现和功能研究对于有效开发治疗乳腺癌的药物具有重大意义。 有研究表明，在乳腺癌中，人X盒结合蛋白1(XBP-1)与ERα共表达，并在一些乳腺肿瘤中过表达。这些结果提示，XBP-1与ERα可能存在相互作用。最近发现，由于剪切方式不同，XBP-1存在两种形式，即XBP-1S和XBP-1U，它们的区别只是C末端不同。本研究基于ERα可与ERE(estrogen response element)结合的原理，利用ERE-luc荧光素酶报告基因，检测了XBP-1对ERα转录活性的影响，并发现XBP-1S和XBP-1U都能提高ERα的转录活性，XBP-1S比XBP-1U使ERα的转录活性提高的更多，这种功能的发挥依赖于ERα的存在，但不依赖于配体(雌激素)的存在。XBP-1S和XBP-1U提高ERα的转录活性是XBP-1S和XBP-1U剂量依赖的。抗雌激素4-OHT和ICI182,780都可降低XBP-1对ERα转录活性的影响。XBP-1提高ERα转录活性具有特异性，它不能提高雄激素受体(AR)的转录活性。XBP-1S和XBP-IU提高ERα的转录活性既通过AF1起作用，也通过AF2起作用，但通过ERα全长才能最大程度地发挥作用。SRC-1是p160类固醇受体共激活福建农林大学硕士学位论文子家族中的一员，XBP一1S和XBP一IU可与SRC一1以协同作用的方式提高ERa的转录活性。免疫共沉淀实验表明，XBP一1S和XBP一IU以激素不依赖的方式与ERa结合，XBP一1S的结合能力大于XBP一IU。GST沉淀实验表明，XBP一1S和XBP一IU可结合ERa，ERa通过DNA结合结构域与XBP一1S和XBP一IU结合，而XBP一1S和XBP一IU与ERa相互作用的区域定位在两个结构域，包括N末端的亮氨酸拉链结构域和C末端激活结构域。N末端的亮氨酸拉链结构域是XBP一1S和XBP一IU提高ERa转录活性所必需的。RLPCR实验表明，XBP一1S和XBP一IU在乳腺癌细胞株中都有表达。凝胶阻滞实验表明，XBP一ls和XBP一IU不能直接与ERE结合，说明XBP一1是通过与ERa的结合来提高ERE一tuc的活性。这些结果表明，XBP一1S和XBP一IU以激素不依赖的方式直接调节ERa信号途径。因此，XBP一1，特别是XBP一ls可能在乳腺癌的发生发展中具有重要作用，有可能成为乳腺癌治疗的新靶标。