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梅花鹿血是一种传统名贵中药。本论文首先分析了梅花鹿血中的主要化学成分;其次,对酶解梅花鹿血制备抗氧化活性多肽的条件进行了优化研究,并对抗氧化活性多肽进行分离纯化和定性分析;最后,对抗氧化活性多肽的抗衰老功能进行了动物试验研究。
梅花鹿血的化学成分分析表明,梅花鹿血中水分含量为81.09%;灰分含量为3.17%;脂肪含量为0.59%;蛋白含量为14.99%;棕榈酸含量为1.65mg/g,硬脂酸含量为0.35mg/g,油酸含量为0.69 mg/g,亚油酸含量为0.98 mg/g,亚麻酸含量为0.87 mg/g;梅花鹿血蛋白中含有17种氨基酸,其中Lcu和Asp的质量分数较高,分别为14.90%和10.99%,其中人体必需氨基酸(Val、Ile、Leu、Phe、Met、Thr、Lys)占氨基酸总量的44.72%。
通过单因素试验和正交试验优化酶解条件,综合考虑水解度和酶解产物对自由基的清除率,结果表明胰蛋白酶优于AS1.398中性蛋白酶。确定胰蛋白酶酶解制备抗氧化活性多肽最佳条件为:酶浓度(酶:蛋白)为8%,底物浓度(鹿血:水)为1:3,pH值为7.3,酶解时间为4小时,酶解温度为56℃;极差值反映出影响水解度和酶解产物对自由基清除能力的各因素排列顺序均为:pH值>温度>底物浓度>酶浓度>时间;此条件下的酶解产物对超氧阴离子自由基和羟基自由基清除率分别可达91.63%和94.32%,水解度为44.32%。
酶解产物经SephadexG-25和DEAE-52纤维素柱层析纯化,得到带有较弱负电荷的抗氧化活性多肽;经高效液相色谱分析,该抗氧化活性多肽主要是以分子量为876Da,463Da,146Da的混合肽;氨基酸组成分析表明,纯化后的抗氧化活性多肽含有17种氨基酸,其中Leu和Lys的质量分数较高,分别达到17.16%和12.34%,人体必需氨基酸(Val、Ile、Leu、Phe、Met、Thr、Lvs)的含量高达52.74%。
动物抗衰老试验表明,所制备的抗氧化活性多肽可以明显减缓D一半乳搪所导致的大鼠衰老。治疗组和模型组相比,血清的SOD活性差异极显著(P<0.01),大脑和肝脏的SOD活性差异显著(P<0.05);血清、大脑和肝脏中MDA含量差异均极显著(P<0.01);大脑中脂褐质含量差异显著(P<0.05),肝脏中脂褐质含量差异极显著(P<0.01)。