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采用碱性蛋白酶Alcalase和风味蛋白酶Flavourzyme作为工具酶对大豆分离蛋白进行水解制备了低分子量的大豆多肽产品,并对大豆多肽的分离纯化进行了研究。
通过单因素分析以及正交实验,对pH、温度、底物浓度、酶量、反应时间等几个重要水解参数进行分析,得到了Alcalase蛋白酶水解大豆蛋白的最适条件为:底物浓度8%(w/w),温度60℃,pH值为8.0,酶浓度为(E/S)为3.6Au/100g。
采用交联葡聚糖凝胶SephadexG-15层析法测定大豆蛋白水解液的分子量分布,以0.05mol/LHAC-NaAC(pH3.7)溶液为凝胶层析洗脱液,流速为0.4mL/min,检测波长为280nm。当蛋白酶Alcalase反应时间为2h时,水解液中的物质分子量大部分集中在300~1500Da之间。利用高压液相色谱(HPLC)进行对照分析,初步探讨了HPLC在大豆多肽分析中应用的可行性。
利用风味蛋白酶Flavourzyme对大豆蛋白的Alcalase水解液进一步水解,进行脱苦研究。通过实验确定了Flavourzyme的最佳水解条件:pH7.0,温度50℃,酶与底物比E/S为20LAPU/g,水解2h便可将苦味值降到2。大豆蛋白水解液的水解度DH为24.2%,蛋白质回收率为73.2%。
通过纯化处理实验,确定了脱色、脱盐的最佳条件:活性炭的添加量为溶液量的1.2%(w/w);711、732阴阳离子交换树脂的比例为2:3(V/V),溶液的处理量为5倍的阴离子交换树脂体积。脱盐脱色处理后溶液颜色呈微黄色,灰分含量减少到2.11%(干基)。
大豆多肽溶液经真空浓缩、喷雾干燥后,得到乳白色或微黄色的固体粉末成品,成品水分含量为5%,蛋白质含量达97%(干基),其可溶性氮指数NSI可达99.7%。测定水解液分子量,分子量主要集中1500Da以下,其中在300~1000Da占65%左右。