蛋鸡J亚群禽白血病分子流行病学调查及致病性研究

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J亚群禽白血病(Subgroup J Avian Leukosis)是由J亚群禽白血病病毒(Subgroup J Avian Leukosis Virus , ALV-J)引起的以髓细胞瘤和其他细胞恶性肿瘤为特征的肿瘤性传染性疾病。起初,该病仅引起肉鸡发病,蛋鸡虽感染ALV-J,但并不诱导肿瘤产生。我国于2004年首次报道商品蛋鸡骨髓瘤ALV-J病例,随后仅有零星报道。然而,2009年以来我国多个省区养鸡场爆发了ALV-J,部分鸡场发病率和死亡率高达50%,给我国蛋鸡养殖业造成了巨大经济损失。为掌握本次我国蛋鸡ALV-J的流行情况,本研究进行了我国部分地区蛋鸡J亚群禽白血病分子流行病学调查及致病性研究,取得了如下成果:采用ELISA抗原检测、特异性PCR以及亚群特异性免疫荧光试验(IFA)等方法,从我国8个省区40个蛋鸡场180份病料中分离和鉴定出19株蛋鸡ALV-J。为分析我国蛋鸡ALV-J毒株来源,克隆了19株ALV-J gp85基因,序列分析及遗传进化分析结果表明:各蛋鸡分离株gp85基因编码氨基酸间的同源性为71.3%~100%。大部分分离毒株(13/19)与英国原型肉鸡株HPRS-103亲缘关系较近;部分分离株(3/19)与美国肉鸡株ADOL-7501关系较近;另有少数分离毒株(3/19)则处于独立分支,其发生了较大变异。为了解蛋鸡血管瘤型ALV-J的序列特征,本研究扩增了3株来自不同地区血管瘤型蛋鸡ALV-J分离株的全基因组序列。测序结果表明:SD09DP03、JL09JL3-1、HLJ09MDJ-1全基因组长度分别为7677、7677、7635bp。与所有公布ALV-J参考毒株相比, 3个毒株具有如下序列特征:(1)5’LTR和5’UTR序列具有急性转化型病毒序列特征;5’LTR U3区缺失NFAP-1和AIB REP1元件,但增加1个C/EBP结合位点;(2)3’UTR区rTM完全缺失,E元件相对保守,DR元件非常保守;(3)gag和pol基因非常保守;env基因变异较大,呈现高度多样性,且出现氨基酸缺失(JL09JL3-1和SD09DP03株均缺失117S;而HLJ09MDJ-1出现缺失61N和116R);同时伴随env基因N-糖基化位点改变。为研究流行蛋鸡ALV-J分离株的致病性,本研究以3株蛋鸡ALV-J毒株(SD09DP03、JL09JL3-1、HuB0903)腹腔注射1日龄SPF白莱航蛋鸡,在感染后的第3、5、7、9、11、13、17、21、24、28、32、34周采集棉拭子、抗凝血、非抗凝血,进行泄殖腔排毒、病毒血症、ALV-J特异性抗体检测;每次采样时同时随机剖解部分鸡,进行病理变化观察。结果表明:(1)各毒株感染组鸡只均存在病毒血症,其阳性率高于60%;(2)各毒株感染组鸡只从3W开始排毒率整体不断上升,之后快速下降(13W~21W),但21W以后90%以上鸡只均排毒;(3)各毒株感染组鸡只产生ALV-J抗体的比例整体不断上升,但21W后抗体快速消退直至最低。(4)各毒株均能诱导骨髓瘤产生,其肿瘤诱导率为6%~10%。病鸡肝、脾、肾等出现特征性髓细胞,与肉鸡株病变相似。本研究分离鉴定了我国蛋鸡ALV-J流行毒株,为研究蛋鸡ALV-J提供了丰富素材;首次发现血管瘤ALV-J毒株的5’LTR和5’UTR序列具有急性转化型病毒特征;ALV-J感染蛋鸡后引起鸡群高比例病毒血症和排毒率可能是当前蛋鸡ALV-J流行的重要原因。以上结果将为研究蛋鸡ALV-J致病机理奠定基础。
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