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目的:抗环瓜氨酸肽(cyclic citrullinated peptide,CCP)抗体由类风湿性关节炎(rheumatoid arthritis,RA)患者B细胞分泌,对RA早期诊断具有特异性,同时对预测骨损伤程度及RA临床预后评估有重要价值。本研究拟建立一种检测人血清中抗CCP抗体含量的胶体金定量检测方法,为该病的预警诊断及预后评估提供一种技术手段,以此来推动该疾病特异性检测方法的进步。方法:1.通过人工合成技术合成CCP多肽,经碳二亚胺偶联技术使CCP多肽与牛血清白蛋白(BSA)偶联,优化最佳偶联条件,对偶联产物应用紫外(UV)法、SDS-PAGE进行鉴定、利用间接酶联免疫吸附法(ELISA)进行生物活性检测,确定最适CCP多肽偶联物。2.研制用于定量检测血清中抗CCP抗体含量的胶体金试纸条。通过对胶体金颗粒、标记pH优化、标记最低抗体量优化、免疫金保护液pH值优化、试纸条材料的选择与处理、最佳包被量的确定等方面研究,对试纸条性能从线性范围、精密性、稳定性、回收率及临床样本的检测等方面进行评价。初步建立人血清抗CCP抗体胶体金定量检测方法。结果:1.确定CCP-BSA偶联12 h为最佳偶联用时,获得可与抗CCP抗体特异结合的CCP-BSA偶联物,经检测鉴定确定偶联成功、产物有效,可用于制备胶体金试纸条。2.本研究建立的间接胶体金定量检测方法的工艺技术条件为:氯金酸与柠檬酸三钠体积比1:1.5制备的胶体金效果最佳;胶体金溶液保存最佳条件为加入0.05%的叠氮钠;标记时1 mL胶体金溶液加入3μL 0.2 mol/mL K2CO3,最低标记抗体量为8.8μg;免疫金保护液最佳pH为8.8;质控线包被羊抗鼠IgG最佳浓度为1.0 mg/mL;检测线包被CCP-BSA偶联抗原最佳浓度为1.5 mg/mL;包被缓冲液中蔗糖含量0.4%;金垫铺金量为400μL/10cm,金标定量仪读数时间为试剂反应后14min。3.建立的胶体金定量检测方法性能指标为:线性范围50~500 RU/mL,R2=0.993,精密性质控品L1批内CV=2.6%,批间CV=4.52%;精密性质控品L2批内CV=2.5%,批间CV=4.28%,高值、中值、低值血清的回收率分别为100.96%、97.17%、91.46%,用40份临床样本与国外试剂盒平行测试,结果表明两者具有相关性,回归方程:Y=1.004X+7.968,R2=0.955。结论:1.利用碳化二亚胺偶联技术成功将CCP多肽与BSA大分子偶联,且偶联产物可与抗CCP抗体特异性结合。2.建立了一种人血清抗CCP抗体胶体金定量检测方法,可初步应用于临床对抗CCP抗体的定量检测,为RA的临床早期预警诊断及预后评估提供技术支撑。