苏氨酸、异亮氨酸立体异构体的手性色谱分离及其在哺乳动物体内分布的研究

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近十年来,有关D-丝氨酸和D-天门冬氨酸的存在、分布和重要的生理作用被广泛和深入地研究,此外大约10种其它的D-型氨基酸也被发现存在于各种动物体内,其生理作用的研究也正在进行中。但已被报道的这些存在于动物体内的D-型氨基酸,都只有一个手性中心,一对对映异构体,而八个必需氨基酸中苏氨酸和异亮氨酸都有两个手性中心,四个立体异构体(两对对映异构体)。为了研究哺乳动物体内苏氨酸和异亮氨酸的四个立体异构体的分布,本文分别建立了二维液相色谱法分离、分析苏氨酸的四个立体异构体和柱前手性衍生化-反相高效液相色谱法分离、分析异亮氨酸的四个立体异构体。苏氨酸立体异构体的分析方法包括:( 1 )用4-fluoro-7-nitro-2,1,3-benzoxdiazole(NBD-F)将氨基酸衍生化;(2)用反相高效液相色谱法分离出苏氨酸和异苏氨酸衍生物(NBD-Thr,NBD-allo-Thr);(3)再用手性固定相色谱分离D-苏氨酸和L-苏氨酸衍生物(NBD-D-Thr,NBD-L-Thr)以及D-异苏氨酸和L-异苏氨酸衍生物(NBD-D-allo-Thr,NBD-L-allo-Thr);并用荧光检测器检测。对该分析方法的线性关系考查结果显示,D-苏氨酸、D-异苏氨酸和L-异苏
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