纸基芯片法检测中药若干评价指标的研究

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近二十年来,中药质量检测技术发展迅速,但仍需进一步研发快速低成本的质量检验技术。本文采用纸基芯片技术检测中药质量,以三种能体现中药整体特征的质量指标为例,分别是α-葡萄糖苷酶抑制活性、抗氧化活性和总酚含量。本论文主要内容包括:1.纸基芯片法检测桑叶提取液抑制α-葡萄糖苷酶活性。通过3D打印与加热熔融处理得到改性滤纸,在改性滤纸上加入α-葡萄糖苷酶制成纸基芯片。在纸基芯片上加入阳性药阿卡波糖,使用智能手机读取颜色结果,根据颜色分量与加入阿卡波糖试剂浓度之间的线性拟合结果筛选出最佳检测指标为颜色分量Y。使用确定性筛选设计优化了活性检测条件。比较了纸基芯片法与常规酶标仪法检测桑叶提取液的结果,统计学检验后发现两种方法所得结果无显著差异。以牛血清白蛋白为酶稳定剂,纸基芯片的检测能力可保持一周以上。完成了纸基芯片法的方法学验证实验以及方法应用,认为该法可用于桑叶提取液的α-葡萄糖苷酶活性抑制结果检测。2.纸基芯片法检测丹红注射液抗氧化活性。使用3D打印法在定量滤纸上打印改性模具,将滤纸和模具置于石蜡正庚烷溶液中浸泡,取出晾干后加热熔融制成“疏醇”改性滤纸,该改性滤纸上能开展乙醇溶液中的化学反应。在该改性滤纸上加入DPPH试剂制成纸基芯片。在纸基芯片上加入抗坏血酸,使用智能手机读取颜色结果,根据颜色分量与加入抗坏血酸浓度之间的关系筛选出最佳检测指标为颜色分量G和灰度。使用优化后指标检测丹红注射液的抗氧化活性,并完成了方法学验证和方法应用。3.连续流合成反应制备检验酚类物质含量的碳量子点。搭建了一套连续流反应装置,采用四甘醇水溶液为溶剂体系,以柠檬酸与乙二胺为原料合成了一种掺氮碳量子点,并表征了碳量子点的光学性能。使用确定性筛选设计建立了实验条件与荧光产率之间的定量关系。以高荧光产率为优化目标,通过模拟实验误差法建立了设计空间并验证。研究发现该碳量子点能被绿原酸、丹酚酸B和芦丁等酚类物质猝灭。碳量子点的荧光猝灭程度与加入的绿原酸溶液浓度呈线性关系,说明所得碳量子点具有定量检测酚类物质的应用潜力。与传统合成技术相比,连续流合成技术为高效率批量制备碳量子点提供了基础。4.碳量子点纸基芯片法检测金银花提取液总酚含量。使用刻字机裁剪层析纸得到正方形纸片,在纸上滴加碳量子点溶液后得到碳量子点纸基芯片。在纸基芯片上加入不同浓度的绿原酸溶液后,纸基芯片在紫外光下呈现出不同强度的荧光结果,使用智能手机获取其颜色数据并筛选出颜色分量G作为检测指标。使用纸基芯片检测金银花提取液中的总酚含量,并与中国药典中的总酚测定法进行对比,统计学检验结果显示两者无显著差异。完成了方法学验证后也将方法用于测定不同批次金银花提取液总酚含量。相比药典方法,碳量子点纸基芯片法无须采用紫外光谱仪,也无须配制稳定性较差的福林酚试剂。
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