从广谱抗稻瘟病粳稻品种云引中图位克隆了稻瘟病抗性候选基因Pi-y43(t),该基因与已克隆的稻瘟病抗性基因Pib位于同一位点,另外,在云引基因组中该位点附近还存在一个假基因Pib2。为了验证云引中抗稻瘟病基因Pi-y43(t)的功能,主要开展了以下研究:1.载体构建和转化,构建Pi-y43(t)过表达载体,通过农杆菌介导转化日本晴和丽江新团黑谷(LTH),获得相应的过表达转基因植株;构建了Pi-y43(t)-Cas9敲除载体,转化粳稻品种云引,获得目的基因敲除转基因植株。构建了Pi-y43(t)亚细胞定位载体,运用原生质体共转染方法,在高分辨率激光共聚焦显微镜下初步观察该基因所表达的蛋白位于细胞核和细胞质中。2.转基因植株的相关验证,对获得转基因植株,进行潮霉素标记基因的初步鉴定,再设计目的基因的特异性引物,进行目标基因的验证。验证结果表明已成功获得含有目的基因Pi-y43(t)的日本晴和丽江新团黑谷转基因植株;同时获得目的基因敲除的转基因植株。3.转基因植株的表型鉴定,通过叶片打孔鉴定的方法对获得的转基因植株进行稻瘟病菌“四川-43”的接菌鉴定,观察各转基因植株对稻瘟病菌株“四川-43”的表型变化情况。结果显示,过表达转基因植株日本晴和丽江新团黑谷均对稻瘟病菌“四川-43”表现出较为明显的抗性;目的基因敲除的云引对稻瘟病菌“四川-43”表现为感病。互补验证结果表明,云引中的Pi-y43(t)确实在水稻的稻瘟病抗性中发挥了一定的作用。