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目的:结直肠癌是最常见恶性肿瘤之一,在我国居癌症发病率和死亡率的第五位。结直肠癌发生过程中会出现原癌基因的激活、抑癌基因的失活、错配修复基因改变、凋亡调节紊乱等一系列生物学变化。目前,仍没有能够监控或体现这些生物学变化的高效分子标记物。因此,研究结直肠癌相关基因及其功能,不仅有利于阐明结直肠癌发生的分子机制,还可能为临床诊治、药物筛选及预后判断提供新的分子标记物。SETDB1(SET domain bifurcated 1,SET结构域分支型1)蛋白是一种组蛋白甲基转移酶,在多种人类实体瘤中呈现高表达,其高表达与肿瘤的生长、转移密切相关。近年来的研究表明,SETDB1很可能是一种促癌基因,但SETDB1在结直肠癌中的功能及分子机制仍不清楚。本课题拟在临床标本、体外实验、体内动物模型中研究SETDB1在结直肠癌发生中的功能,并通过体外实验研究SETDB1在结直肠癌中调控Wnt/β-catenin信号通路的分子机制,进而为结直肠肿瘤的发生提供新的理论依据。方法:1、采用免疫组织化学技术检测SETDB1在结直肠癌组织中的表达情况,并分析SETDB1在癌组织中的表达与各临床病理参数的关系。2、利用质粒转染技术建立稳定过表达/敲低SETDB1的HCT116、SW480细胞株,采用CCK8实验、EdU细胞增殖实验、软琼脂集落形成实验、划痕实验、Transwell侵袭实验、流式细胞仪及皮下成瘤实验检测过表达/敲低SETDB1对HCT116、SW480细胞体外增殖能力、集落克隆能力、迁移能力、侵袭能力、细胞周期进程及体内成瘤能力的影响。3、采用RT-qPCR实验、Western Blot实验和免疫荧光实验检测过表达/敲低SETDB1对HCT116、SW480细胞中EMT(epithelial–mesenchymal transition,上皮-间质转化)标记物E-cadherin和Vimentin、EMT信号通路Wnt/?-catenin关键因子?-catenin、APC、GSK-3?以及靶因子c-Myc和CyclinD1的影响。结果:1、SETDB1在结直肠癌组织中的表达:在结直肠癌中,SETDB1在癌组织中的表达明显高于癌旁组织(P<0.001),SETDB1阳性表达与分化程度、肿瘤大小、术前血清CEA水平具有统计学相关性(P<0.05),而与年龄、性别、肿瘤部位、pTNM分期、淋巴结转移等无统计学相关性(P>0.05)。2、SETDB1对结直肠癌HCT116、SW480细胞体内、体外生物学行为的影响:过表达SETDB1增强HCT116、SW480细胞的体外增殖、集落克隆形成、迁移、侵袭、体内成瘤能力,并促进细胞周期从G0/G1期向S期和G2/GM分化;敲低SETDB1降低HCT116、SW480细胞的体外增殖、集落克隆形成、迁移、侵袭、体内成瘤能力,并使细胞周期阻滞在G0/G1期。3、SETDB1在结直肠癌细胞中调控EMT通路Wnt/?-catenin的分子机制:过表达SETDB1后,E-cadherin在mRNA和蛋白水平均明显降低,Vimentin、c-Myc、CyclinD1在mRNA和蛋白水平均明显升高,细胞核内?-catenin的蛋白水平明显升高,APC和GSK-3?的蛋白水平明显降低;敲低SETDB1后,E-cadherin在mRNA和蛋白水平均明显升高,Vimentin、c-Myc、CyclinD1在mRNA和蛋白水平均明显降低,细胞核内?-catenin的蛋白水平明显降低,APC和GSK-3β的蛋白水平明显升高。结论:1、SETDB1在结直肠癌组织中表达上调,其高表达与分化程度、肿瘤大小、术前血清CEA水平相关。2、SETDB1促进结直肠癌细胞体外增殖、迁移、侵袭及细胞周期进程,并增强癌细胞体内成瘤能力。3.、SETDB1可能促进Wnt/β-catenin信号通路激活,促进结直肠癌EMT进程,进而促进结直肠癌发生。