第一部分干扰素-α和索拉菲尼联合治疗肝细胞癌的研究肝癌是目前全球范围内最常见的并且具有高致死率的肿瘤之一,2008年,全球肝癌新发病例有748,300例,以及695,900例死亡病例。早期肝癌病人通过手术切除、肝脏移植或者射频消融等方法能获得很好的治疗效果。然而多数病人都在中晚期被发现,只能接受姑息性疗法,但疗效甚微。因此,对于晚期肝癌病人急需新型的更有效的治疗方案。干扰素-α和索拉菲尼广泛用于治疗各种恶性肿瘤。基于这两种药物的联合用药治疗方案也被广泛研究。目前还没有文献报道干扰素-α和索拉菲尼联合治疗肝癌的效果。我们首先通过WST-8染色法证实了干扰素-α和索拉菲尼能联合抑制肝癌细胞系的细胞活力。进一步实验证明联合用药能明显抑制肝癌细胞系的细胞周期进程及引起细胞凋亡。为了探讨下游机制,我们检测了细胞周期和细胞凋亡相关蛋白,发现干扰素-α和索拉菲尼联合作用于Cyclin A, Cyclin B和抗凋亡Bcl-2家族蛋白。通过检测信号通路,发现索拉菲尼能抑制干扰素-α引起的STAT3、AKT和ERK的活化,但对STATl没有影响。最后,裸鼠成瘤的实验证实了干扰素-α和索拉菲尼在体内也具有联合抑制肝癌生长和促进肝癌细胞凋亡的作用。我们的研究为之后干扰素-α和索拉菲尼的临床应用奠定了基础,为晚期肝癌患者的治疗提供了新的潜在的方案。第二部分RACK1调控干扰素-α引起的STAT3的活化及细胞凋亡的研究干扰素-α为一型干扰素家族成员,最早被发现具有广谱抗病毒的效应。干扰素-α和受体结合后,主要通过激活JAK-STAT通路发挥其生物学功能,MAPK和AKT通路也参与其中。干扰素-α除了激活STAT1发挥其抑制肿瘤的功能,也能激活癌基因STAT3,但活化机制尚不明确。如今,干扰素-α被广泛用于治疗各种肿瘤,包括肝癌。但是有文献报道肝癌细胞存在干扰素抵抗的现象,具体机制仍不明确。RACK1最早被报道为PKCβⅡ的受体,可以与多种激酶及膜受体相互作用包括干扰素受体、STAT3、ERK等等,在细胞应答过程中发挥重要作用。有多篇文献报道RACK1在多种细胞内参与凋亡抵抗的作用。我们首先在肝癌细胞中发现干扰素-α能显著引起STAT3丝氨酸及酪氨酸的磷酸化,并且过表达RACK1能进一步加强两个位点的活化。有文献报道ERK能介导STAT3丝氨酸的活化。我们加入了ERK的抑制剂后,发现其能特异地抑制STAT3丝氨酸的磷酸化。同时,免疫共沉淀实验发现过表达RACK1加强了ERK与STAT3的相互作用。此外,过表达RACK1减少了干扰素-α诱导的肝癌细胞凋亡。综上,我们的实验为IFN-α诱导STAT3的活化机制奠定了基础,并发现RACK1可能作为一个潜在的靶点,减少肝癌细胞对IFN-α的抵抗。