BRAF作为治疗肿瘤的有效作用靶点,众多医药公司相继开发了多种BRAF激酶抑制剂。尽管这些药物在临床上都取得了显著的疗效,但是由于用药后迅速产生耐药性而引发新的问题。因此,为克服临床上BRAF激酶抑制剂固有的和获得性的耐药性问题,开发新型的、克服耐药性的抗肿瘤药物是十分必要的。二氢吡唑作为重要的含氮的五元杂环化合物,具有较强的生物活性,如抗癌、抗菌、抗病毒等,成为近年被关注的热点。本课题基于潜在的耐药机制,尤其是PI3K/AKT/mTOR信号通路过度表达,采用“组合药效团”的设计策略,在2-吡唑啉的N-1位上引入结合模型中起重要作用的PI3K药效团,建立含2-吡唑啉结构的化合物库。根据文献报道,建立Vemurafenib耐药肿瘤细胞系A375^R10和Colo205^R17。利用CCK-8法从课题组前期合成的化合物库里筛选出高效的抗耐药肿瘤细胞的先导化合物D₇(A375^R10 IC₅₀=13.89μM和Colo205^R17 IC₅₀=7.28μM)。又进一步结构改造,合成了24个二氢吡唑磺胺类衍生物,所合成的化合物通过¹H NMR、¹³C NMR和HRMS确定了结构,并通过XRD确定一个化合物的绝对构型。体外抗增殖活性筛选出化合物E₁₄(A375^R10 IC₅₀=20.93μM和Colo205^R17 IC₅₀=3.25μM),并进行了生物活性评价。激酶活性结果表明化合物D₇(PI3KαIC₅₀=2.15μM)和E₁₄(PI3KαIC₅₀=1.49μM)可能是潜在的PI3Kα抑制剂。细胞周期和凋亡实验结果表明化合物E₁₄以剂量依赖性诱导Colo205^R17细胞停滞在G1期诱导细胞早期凋亡。通过蛋白印迹法研究凋亡机制,发现化合物E₁₄使细胞内的caspase-3、caspase-9和PARP裂解水平以剂量依赖性增加。