【摘 要】
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目的:通过mRNA差异显示技术(DDRT-PCR)研究人高、低转移肺大细胞癌细胞系基因差异表达谱,克隆与肿瘤转移相关的基因,并初步探讨其生物功能及其在转移过程中的作用。 方法:应用
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目的:通过mRNA差异显示技术(DDRT-PCR)研究人高、低转移肺大细胞癌细胞系基因差异表达谱,克隆与肿瘤转移相关的基因,并初步探讨其生物功能及其在转移过程中的作用。 方法:应用HIEROGLYFH mRNA Profile System(Genomyx,Foster,Calif)系统对高、低转移人肺大细胞癌细胞系的mRNA进行差异显示,切胶回收差异表达cDNA,克隆测序后与NCBI提供的GenBank数据库进行Blast比对;选择一条合适的片段为起始,应用RACE技术克隆该基因的全长序列;应用Northern Blotting实验观察其在人类各种正常组织中的表达情况;通过构建LCMR1与GFP的融合载体,转染人类支气管上皮细胞,观察该基因的表达产物在细胞内的定位;最后通过构建LCMR1与GST的原核表达载体,在大肠杆菌中表达该蛋白,为进一步研究该蛋白质的功能打下了坚实的基础。 结果:获得差异表达cDNA 50条,其中已知功能基因18条,未知功能基因16条,DNA来源16条,EST 4条;克隆到一条基因的全长,登陆到NCBI的GenBank数据库,并命名为LCMR1;Northern Blotting实验显示其在多种实质性脏器中的表达较高;该基因的产物被初步定位到细胞浆;本研究还建立了LCMR1稳定的原核表达系统及诱导表达的条件。 结论:人高、低转移肺大细胞癌细胞系的基因表达差异较大,转移的过程受基因的表达与调控的影响,应用DDRT-PCR技术找到了可能在肿瘤转移的过程中起作用的基因,有可能为肿瘤的诊断和治疗提供新的线索。
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