小檗碱是从毛茛科(Ranunculaceae)黄连(CoptischinensisFranch)、三角叶黄(CoptisdeltoidenC.Y.chengetHsiao)、云连(Coptisteetawall)的干燥根茎中提取的一种苯并异喹啉类季铵型生物碱。 长期以来对小檗碱生化、药理、临床的研究，证明它是一种没有细胞毒和致突变作用的、具有广泛用途的药物。小檗碱具有抗心律失常、抗菌、抗炎、抗疟和抗脑缺血等活性。近来，吴俊芳等报道小檗碱对小鼠和大鼠脑缺血有保护作用，刘国林等报道其可改善痴呆高危人群的认知功能。 阿尔茨海默病(AD)是一种最为常见的神经退行性疾病。一些研究已证明氧化应激和β-淀粉样蛋白(Aβ)在AD的发生发展中扮演着重要角色。 本研究采用形态学、生物化学、分子生物学和钙影像等方法，研究小檗碱对过氧化氢(H2O2)和Aβ诱导培养大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤(PC12)细胞损伤的作用及其机制，在细胞水平探讨小檗碱神经保护作用的机制，为其应用于神经退行性疾病提供实验依据，为AD中药防治研究提供理论依据。 1.小檗碱对H2O2诱导PC12细胞损伤的作用及其机制 本研究采用H2O2(150μM)处理细胞6小时制造细胞损伤模型，.应用细胞增殖抑制实验(MTT)评价，并检测细胞脂质过氧化物丙二醛(MDA)含量、各种抗氧化酶，如谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-px)、超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化氢酶(CAT)的活性、细胞内活性氧含量(ROS)和胞内游离钙浓度([Ca2+]i)的变化以及细胞凋亡。实验发现给予H2O2，MDA含量明显升高，而GSH-px、SOD和CAT的活性降低，细胞内ROS含量和[Ca2+]i增加，并出现凋亡的形态特征。小檗碱(0.01-10μM)预处理24小时，再用H2O2(150μM)处理细胞。与H2O2组比较，结果表明细胞存活率增加、细胞MDA含量降低、各种抗氧化酶的活性升高、细胞内的ROS含量降低、凋亡细胞数减少和[Ca2+]i降低。提示小檗碱对H2O2诱导的PC12细胞损伤有明显的保护作用。 2.小檗碱对Aβ-(25-35)诱导(PC12)细胞损伤的作用及其机制 本研究采用Aβ(25-35)25μM处理细胞36小时制造细胞损伤模型，应用细胞增殖抑制实验(MTT)评价，并检测细胞抗氧化酶，GSH-px、SOD、细胞内ROS含量和[Ca2+]i的变化以及细胞凋亡。发现给予Aβ后，胞内GSH-px、SOD的活性降低，细胞内ROS含量和[Ca2+]i增加，并出现凋亡的形态和特征，与凋亡有关的caspase-3蛋白表达明显升高。 小檗碱(0.01-10μM)预处理24小时，再用Aβ(25μM)处理细胞。与Aβ组比较，结果表明细胞存活率增加、抗氧化酶的活性升高、细胞内的ROS含量降低、[Ca2+]i降低、凋亡细胞数减少和caspase-3蛋白表达明显下降。提示小檗碱对Aβ(25-35)诱导的PC12细胞损伤有明显的保护作用。