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目的:随着宫颈癌持续增长的发生率和死亡率,探寻针对宫颈癌疗效好、副反应低的治疗方案具有重要的现实意义。本实验通过TRAM-34和卡铂单独与联合作用于宫颈癌HeLa细胞,观察不同给药方案对HeLa细胞的细胞形态、增殖、细胞凋亡、细胞周期的影响。探讨TRAM-34联合卡铂作用于HeLa细胞是否优于卡铂单独作用于HeLa细胞。为临床有效治疗宫颈癌寻找新的化疗辅助用药提供可能性和相关初步实验证据。方法:1.不同浓度的TRAM-34、卡铂(carboplatin,CBP)作用于宫颈癌HeLa细胞后,通过CCK-8测定细胞的增殖抑制率,SPSS软件计算出相应的药物半抑制浓度IC50(half maximal inhibitory concentration),筛选出各自的最适浓度后进行下一步实验。2.根据最适浓度进行实验分组,设为对照组、TRAM-34组、卡铂组、TRAM-34联合卡铂组;各组分别处理HeLa细胞并作用不同时间(24h、48h、72h)后,CCK-8分别测定细胞增殖抑制率,用相应的统计学方法分析实验数据。3.各组处理宫颈癌HeLa细胞并作用不同时间(24h、48h、72h)后,在倒置相差显微镜下观察细胞形态的改变。4.Annexin V-7AAD双染色测定卡铂和TRAM-34单独及联合作用于HeLa细胞24h、48h、72h的细胞凋亡率。5、PI染色测定卡铂和TRAM-34单独及联合作用于HeLa细胞24h、48h、72h的细胞周期分布的变化。结果:1.CCK-8测定OD值后计算出细胞增殖抑制率,经SPSS17.0软件分析后提示,卡铂的IC50为49.2ug/ml,TRAM-34的IC50为40.5μM,故选取卡铂的最适浓度为50ug/ml、TRAM-34的最适浓度为40μM进行下一步实验。2.CCK-8测定结果显示:TRAM-34、卡铂单独及联合作用于HeLa细胞时均具有抑制细胞增殖的作用,且随着时间延长抑制作用逐渐增强(P<0.001);且卡铂对HeLa细胞的增殖抑制作用强于TARM-34单独作用时;TRAM-34联合卡铂作用于HeLa细胞时增殖抑制作用强于卡铂单独作用时,且随着时间延长抑制作用增强。3.倒置相差显微镜下显示:HeLa细胞皱缩、漂浮、变圆、胞浆减少、细胞核固缩,随着药物作用时间逐渐延长后这种形态改变更加明显。4.PE Annexin V-7AAD染色显示:TRAM-34、卡铂单独及联合作用于HeLa细胞时均有促进细胞凋亡的作用(P<0.001),且随着时间延长促进作用逐渐增强。且卡铂组对HeLa细胞促凋亡作用强于TARM-34组,TRAM-34联合卡铂组作用于HeLa细胞时促凋亡作用强于卡铂单独作用时,且随着时间延长促进作用增强。5.PI染色显示:TRAM-34、卡铂单独及联合作用于HeLa细胞时均对细胞周期有阻滞作用(P<0.001),且随着时间延长促进作用增强。卡铂主要表现为S期阻滞;TARM-34主要表现为G1期阻滞。TRAM-34联合卡铂主要表现为G1+S期阻滞。结论:(1)卡铂与TRAM-34单独应用于宫颈癌HeLa细胞均具有抑制细胞增殖、促进细胞凋亡作用,并与作用时间呈正相关;而卡铂的作用效果优于TRAM-34;提示二者均有抗瘤作用;(2)卡铂与TRAM-34联合应用于宫颈癌HeLa细胞时,表现出的抑制细胞增殖、促进细胞凋亡作用优于卡铂单独作用时。提示卡铂与TRAM-34在对Hela细胞的抑制细胞增殖、促进细胞凋亡的作用上有协同促进效应,故推测TRAM-34可以增强卡铂在宫颈癌治疗中的化疗效果;(3)卡铂与TRAM-34单独与联合作用于宫颈癌HeLa细胞均具有细胞周期阻滞效应。卡铂主要表现为S期阻滞;TRAM-34主要表现为G1期阻滞;TRAM-34联合卡铂主要表现为G1+S期阻滞,系TARM-34的G1期阻滞效应与卡铂的S期阻滞效应的叠加。