普那霉素是一种链阳性菌素类抗生素,由始旋链霉菌发酵产生,对多种耐药菌包括耐甲氧西林的金黄色葡萄球菌、耐万古霉素的肠球菌等在内的多数G+均有很强的杀菌作用,被众多专家推荐为治疗恶性感染的特选良药。当前,由于其发酵效价低,成本高昂,价格昂贵。本文以提高普那霉素产量为目标,对始旋链霉菌进行菌种选育,对培养基,发酵工艺进行优化,对15 L发酵罐发酵工艺进行了初步探索,得出了以下结论:1)对原始菌株进行了紫外线和亚硝酸复合诱变以及紫外线和抗生素抗性筛选相结合的菌种选育,挑选6株发酵单位相对较高的,进行稳定性检测,结果显示,UL014较其它五株突变菌株更为稳定,经过5次传代,产量下降了 10%,发酵效价为348 μg/mL,较出发菌株发酵效价提高54.67%。2)对发酵培养基进行部分因子试验和正交试验,确定出一组发酵培养基,以调整后的条件进行发酵验证,试验表明优化后的发酵效价较未优化前的提高了 22.9%,达到了 455 μg/mL。并在此基础上对发酵温度、pH、溶氧、接种量、剪切力进行优化,得出最佳工艺条件,试验表明优化后的普那霉素发酵效价较未优化前的提高了9.8%,达到了 500μg/mL。再通过普那霉素发酵中期添加赖氨酸(0.7mg/100mL)、丝氨酸(0.5mg/100mL)和脯氨酸(0.3mg/100mL),经68h普那霉素发酵测其效价为598 μg/mL,较对照试验提高约8.7%。3)初步研究了普那霉素发酵与大孔吸附树脂分离耦合工艺,选择在28 h,一次补加8%的LD605型大孔吸附树脂将普那霉素的发酵效价在原来基础上增加了 45%,即发酵效价达到870 μg/mL。4)进行了普那霉素发酵罐适应性试验,并通过连续性补料和间歇性补料试验对比,证明了连续性向普那霉素发酵中补加葡萄糖,产生较强的葡萄糖效应,抑制产物的积累;改用间歇补料工艺有效地缓解了葡萄糖效应,使普那霉素得到了有效富集,产率得到了有效提高,为深入研究提供了一定基础。