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免疫磁性微球定向富集稀样本中的靶物质具有特异性强、高效快速等优点。本课题首先用牛乳源蛋白β-CN免疫大白兔制备得到抗血清，经盐析和层析纯化后得到兔抗β-CN IgG；对反相悬浮乳液包埋法制备磁性微球的条件进行了优化，对制备得到的微球进行醛基化和嗜硫修饰，并同未修饰微球一起进行了抗体吸附和抗原富集的性能比较，确定最优修饰方法；用柠檬酸三钠还原法制备胶体金，标记盐析IgG后用于金标垫的包被，检测垫经层析IgG和二抗包被后组装各部件得到β-CN胶体金免疫层析试纸条，对其灵敏性、特异性及稳定性进行测试，并用其对三种免疫磁性微球的抗原富集液进行定性检测。特异性多克隆抗体的制备。选取牛乳源蛋白β-CN做为抗原免疫大白兔，颈动脉取血后得到的抗血清用饱和硫酸铵分级盐析法（50%、40%、33%）粗分离抗体，用蛋白A亲和色谱柱对粗分离的抗体进行层析纯化。考马斯亮蓝法测定盐析和层析样品的蛋白含量分别为2.42μg/ml和1.06μg/ml，其中层析样品经SDS-PAGE检测分析得抗体纯度达到95%以上，用间接ELISA法测定两者效价均为1:8000。壳聚糖/明胶磁性微球的制备。采用反相悬浮乳液包埋法制备磁性微球并进行优化试验，确定最佳方案为：水相为3%壳聚糖-2%明胶-1%磁性粒子；油相液体石蜡/乳化剂span-80为1:0.03；水油比为1:4;最佳乳化时间8-10min；最佳转速575r/min；固化交联剂25%戊二醛加入量为0.5ml/5ml水相样品；磁性微球洗涤顺序为石油醚、丙酮：水3:1、异丙醇。得到的磁性微球经SEM拍照观察粒径在3-8μm范围内，磁响应性良好。磁性微球修饰及性能比较。对微球进行醛基化和嗜硫修饰，同未修饰微球一起进行磁响应性、BSA吸附效果、抗体吸附量、抗体吸附稳定性及抗原富集效果的比较，其中醛基化磁性微球各项性能均优于其它两种，每1g醛基化微球的IgG吸附量为118.5μg/ml，经抗原解析剂作用后抗体保留率为94.47%，用醛基化免疫磁性微球富集抗原β-CN后，其富集液中抗原纯度较高，抗原富集倍数为3.19。免疫胶体金制备。采用柠檬酸三钠还原法制备稳定无沉淀的胶体金溶液，用盐析兔抗β-CN IgG对其进行标记，确定最佳标记量为盐析兔抗β-CN IgG（242μg/ml）26μl/ml胶体金，最佳标记pH是8.0，制备免疫胶体金溶液并进行纯化，间接ELISA测定其效价为1:800。β-CN胶体金免疫层析试纸条制备。通过优化试验确定试纸条各部分处理如下，金标垫（玻璃纤维素膜）用PBS1:1稀释的免疫胶体金包被；硝酸纤维素膜上T线用400μg/ml兔抗β-CN IgG画线包被6次共3μl，C线用200μg/ml羊抗兔IgG画线包被3次共1.5μl，各部件准备好后组装试纸条。β-CN胶体金免疫层析试纸条对β-CN标准溶液和脱脂牛乳检出线均为31.25μg/ml。用试纸条对未修饰、醛基化、嗜硫化免疫磁性微球的β-CN富集液进行定性检测，结果分别为弱阳性、强阳性和弱阳性，表明富集过程对抗原的反应原性未产生影响,并且制备的试纸条可用于抗原富集液的检测。本课题制备的醛基化免疫磁性微球具有较好的时间、抗原解析剂稳定性的同时对抗原达到一定的富集效果，为抗原的特异性、快速富集提供了实验基础。β-CN胶体金免疫层析试纸条对富集抗原的定性检测为试验结果现场提供了可能。两者的结合应用将会为高效富集靶物质提供良好的技术支持。