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目的:研究中药石香膏对大鼠糖尿病溃疡的愈合作用及对溃疡创面肉芽组织中AGEs、VEGF、CD34含量、创面组织修复情况、创面肉芽组织中RAGE、P65、eNOS蛋白表达水平的影响,从分子水平来探讨中医药促进创面修复的机理,为糖尿病溃疡的预防及治疗的进一步研究提供理论依据。
方法:40只清洁级雄性SD大鼠随机分正常对照组、阳性对照组、贝复济组、石香膏组,每组每时间点(7d/14d)5只。其中阳性对照组、贝复济组、石香膏组以注射柠檬酸钠缓冲液溶解链脲佐菌素方式建立糖尿病模型。随后制作糖尿病溃疡模型,注射一周后,剃去正常对照组、阳性对照组、贝复济组、石香膏组大鼠背部毛发,以标准无菌操作根据圆形区域剪除表皮层、真皮层以及皮下,造成与深层筋膜外界相通的创口,其中阳性对照组、贝复济组、石香膏组为糖尿病溃疡模型。分别在创面造模后第7天、第14天取正常对照组、阳性对照组、贝复济组、石香膏组大鼠背部创面肉芽组织标本。之后以IHC检测各组大鼠背部创面肉芽组织中AGEs、VEGF、CD34含量;HE染色检测各组大鼠背部创面样本病理情况变化;WB检测各组大鼠背部创面肉芽组织中RAGE、P65、eNOS蛋白水平。
结果:1.IHC检测各组大鼠背部创面样本(肉芽组织)中的AGEs、VEGF、CD34显示:(1)7天的样本,与正常对照组对比,阳性对照组、贝复济组AGEs含量明显上调,石香膏组的AGEs的含量明显下调。与阳性对照组比较,各给药组AGEs的表达下调;与石香膏组比较,贝复济组的AGEs含量上调。14天时间点的样本,与正常对照组对比,阳性对照组、贝复济组、石香膏组的AGEs的含量明显上调,与阳性对照组比较,各给药组AGEs的表达下调,与石香膏组比较,贝复济组的AGEs含量上调。(2)在7天与14天时间点的样本与正常对照组对比,阳性对照组VEGF含量下调,贝复济组、石香膏组VEGF的含量明显上调,与阳性对照组比较,各给药组的明显含量上调:与石香膏组比较,贝复济组的VEGP表达下调。(3)在7天与14大时间点的样本与正常对照组对比,阳性对照组CD34含量下调,贝复济组、石香膏组CD34的含量明显上调,与阳性对照组比较,各给药组的明显含量上调;与石香膏组比较,贝复济组的CD34含量下调。
2.HE染色检测各组大鼠背部创面肉芽组织病理情况变化:在第7天与第14天后正常对照组与阳性对照组镜下均可见大片未修复组织。而与石香膏与贝复济组在造模7天、14天后创面组织修复情况均较好,镜下可见较多的纤维细胞和成纤维细胞。
3.WB检测各组大鼠背部创面肉芽组织中RAGE、P65、eNOS蛋白水平:7天、14天后的样本,和正常对照组对比,阳性对照的RAGE、NF-κBp65相对表达量升高、eNOS相对表达量降低,差异有统计学意义。石香膏组和贝复济组中RAGE、NF-κBp65相对表达量降低,eNOS相对表达量升高,差异有统计学意义。和阳性对照组相比,贝复济组和石香膏组中RAGE、NF-κBp65相对表达量降低,eNOS相对表达量升高,差异有统计学意义。和贝复济组相比,石香膏组中RAGE、NF-κBp65相对表达量降低,eNOS相对表达量升高,差异有统计学意义。
结论:1.在分析正常对照组、阳性对照组、石香膏组、贝复济组经过3种实验的结果之后,验证了本实验有关各因子及信号通路蛋白表达对创面愈合的影响。
2.使用石香膏对于糖尿病溃疡创面的治疗,能够明显抑制AGEs,并促进VEGF、CD34表达上调;并且在HE染色后镜下观察,使用石香膏可以得到较好的愈合效果;在WB蛋白水平的表达实验中,其对创面愈合有负面作用的RAGE与NF-kBp65表达量均下调,而有利于创面愈合的eNOS表达上调。同目前广泛应用于创面修复的贝复济对比,效果更优。
方法:40只清洁级雄性SD大鼠随机分正常对照组、阳性对照组、贝复济组、石香膏组,每组每时间点(7d/14d)5只。其中阳性对照组、贝复济组、石香膏组以注射柠檬酸钠缓冲液溶解链脲佐菌素方式建立糖尿病模型。随后制作糖尿病溃疡模型,注射一周后,剃去正常对照组、阳性对照组、贝复济组、石香膏组大鼠背部毛发,以标准无菌操作根据圆形区域剪除表皮层、真皮层以及皮下,造成与深层筋膜外界相通的创口,其中阳性对照组、贝复济组、石香膏组为糖尿病溃疡模型。分别在创面造模后第7天、第14天取正常对照组、阳性对照组、贝复济组、石香膏组大鼠背部创面肉芽组织标本。之后以IHC检测各组大鼠背部创面肉芽组织中AGEs、VEGF、CD34含量;HE染色检测各组大鼠背部创面样本病理情况变化;WB检测各组大鼠背部创面肉芽组织中RAGE、P65、eNOS蛋白水平。
结果:1.IHC检测各组大鼠背部创面样本(肉芽组织)中的AGEs、VEGF、CD34显示:(1)7天的样本,与正常对照组对比,阳性对照组、贝复济组AGEs含量明显上调,石香膏组的AGEs的含量明显下调。与阳性对照组比较,各给药组AGEs的表达下调;与石香膏组比较,贝复济组的AGEs含量上调。14天时间点的样本,与正常对照组对比,阳性对照组、贝复济组、石香膏组的AGEs的含量明显上调,与阳性对照组比较,各给药组AGEs的表达下调,与石香膏组比较,贝复济组的AGEs含量上调。(2)在7天与14天时间点的样本与正常对照组对比,阳性对照组VEGF含量下调,贝复济组、石香膏组VEGF的含量明显上调,与阳性对照组比较,各给药组的明显含量上调:与石香膏组比较,贝复济组的VEGP表达下调。(3)在7天与14大时间点的样本与正常对照组对比,阳性对照组CD34含量下调,贝复济组、石香膏组CD34的含量明显上调,与阳性对照组比较,各给药组的明显含量上调;与石香膏组比较,贝复济组的CD34含量下调。
2.HE染色检测各组大鼠背部创面肉芽组织病理情况变化:在第7天与第14天后正常对照组与阳性对照组镜下均可见大片未修复组织。而与石香膏与贝复济组在造模7天、14天后创面组织修复情况均较好,镜下可见较多的纤维细胞和成纤维细胞。
3.WB检测各组大鼠背部创面肉芽组织中RAGE、P65、eNOS蛋白水平:7天、14天后的样本,和正常对照组对比,阳性对照的RAGE、NF-κBp65相对表达量升高、eNOS相对表达量降低,差异有统计学意义。石香膏组和贝复济组中RAGE、NF-κBp65相对表达量降低,eNOS相对表达量升高,差异有统计学意义。和阳性对照组相比,贝复济组和石香膏组中RAGE、NF-κBp65相对表达量降低,eNOS相对表达量升高,差异有统计学意义。和贝复济组相比,石香膏组中RAGE、NF-κBp65相对表达量降低,eNOS相对表达量升高,差异有统计学意义。
结论:1.在分析正常对照组、阳性对照组、石香膏组、贝复济组经过3种实验的结果之后,验证了本实验有关各因子及信号通路蛋白表达对创面愈合的影响。
2.使用石香膏对于糖尿病溃疡创面的治疗,能够明显抑制AGEs,并促进VEGF、CD34表达上调;并且在HE染色后镜下观察,使用石香膏可以得到较好的愈合效果;在WB蛋白水平的表达实验中,其对创面愈合有负面作用的RAGE与NF-kBp65表达量均下调,而有利于创面愈合的eNOS表达上调。同目前广泛应用于创面修复的贝复济对比,效果更优。