【摘 要】
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现如今,对蛋白质组学的研究越来越深入,实验方法与技术也不断提高。随着稳定同位素标记技术和液相色谱-质谱联用技术的发展,已成为分析蛋白质组学分析的重要手段,利用化学衍生的办法将同位素引入目标物中,通过在色谱图中比较轻、重标记试剂标记的同一目标物的峰强度来进行定性和定量分析,可使一些没有吸收基团或离子化程度差的物质更容易进行检测。硫醇化合物参与了生命体内多种复杂的生物学过程,对疾病检测等发挥了重大作用
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现如今,对蛋白质组学的研究越来越深入,实验方法与技术也不断提高。随着稳定同位素标记技术和液相色谱-质谱联用技术的发展,已成为分析蛋白质组学分析的重要手段,利用化学衍生的办法将同位素引入目标物中,通过在色谱图中比较轻、重标记试剂标记的同一目标物的峰强度来进行定性和定量分析,可使一些没有吸收基团或离子化程度差的物质更容易进行检测。硫醇化合物参与了生命体内多种复杂的生物学过程,对疾病检测等发挥了重大作用,因此在生命科学中具有非常重要的地位,但是其含量较低且样品较为复杂,我们通过设计合成一种衍生化试剂,将其与目标物反应并进行分析检测,建立了一种较为方便的对氨基硫醇化合物进行测定的方法。主要研究内容如下:一、通过简单的合成制备衍生化试剂1-（2,4-dinitro5-fluorine）-4,4-dimethylpiperazine（MPPZ）和其氘代试剂d3-MPPZ,该衍生化试剂可与氨基酸或多肽中的氨基反应,从而对目标物进行标记,其紫外吸收强,自带一个正电荷,易离子化等特点可以极大地提高检测灵敏度。此外,该衍生化试剂还有合成方法快速简单、衍生化反应条件温和、成本低廉、稳定性好等几个优点。二、探究MPPZ与氨基酸、多肽、氨基酸侧链官能团、氨基硫醇化合物的反应,并探索其最佳衍生化条件及色谱分离条件,将衍生化反应后产物进行高效液相色谱及液相色谱-串联质谱检测分析。结果发现,MPPZ无法与氨基特异性结合,除了氨基外,MPPZ也与酚羟基和巯基反应。但相对于类似的桑格试剂来说,优点是不与咪唑集团反应,减少了副产物的产生。当氨基酸和多肽中仅有氨基一种反应基团时,产物峰保留时间随被标记的氨基数量的增加而增加,当只有一个或两个氨基被标记时,产物峰保留时间出现在MPPZ峰之前;当多肽中除了氨基还有其他基团如酚羟基参与反应,产物峰出现在MPPZ峰之后;当多肽为磷酸化肽时,产物保留时间较非磷酸化肽产物保留时间要长,因此MPPZ对于磷酸化肽和非磷酸化肽的鉴定和分析具有一定作用。与氨基硫醇化合物反应时,随氨基和巯基的距离越来越远,反应活性越来越差。三、选择了唾液作为生物样品,脱蛋白处理后研究唾液中几种氨基硫醇化合物及其氧化物,进行LC-MS/MS检测,并成功在唾液中检测出了谷胱甘肽及其氧化物,测定最低检测限为50 nM。
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