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背景：采用配体修饰脂质体能实现配体与受体的特异性结合,使药物能达到定向传递,是现在抗肿瘤主动靶向脂质体的研究热点之一。本文制备NGR导向磷脂化合物修饰(后面称NGR修饰)的脂质体,考察脂质体的药剂学性质和细胞摄取特性以及其肿瘤血管靶向性和细胞内药物分布行为,为NGR修饰脂质体的应用提供实验基础和理论依据。目的：1.合成并鉴定NGR导向磷脂化合物。2.研究NGR导向磷脂化合物比例对脂质体性质的影响。3.考察NGR修饰脂质体的肿瘤血管靶向性。4.考察不同磷脂组成对NGR修饰脂质体性质的影响。5.研究NGR修饰载药脂质体的抗肿瘤药效和细胞内药物分布。方法：1.NGR导向磷脂化合物的合成与鉴定：将NGR多肽连接到1,2-二硬脂酰-sn-甘油-3-磷脂酰乙醇胺-Ⅳ-[羧基(聚乙二醇)2000]铵盐(DSPE-PEG2000-COOH)上,得到DSPE-PEG2000-NGR(二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇2000-NGR),即NGR导向磷脂化合物,将其与磷脂材料混合,制得NGR修饰的脂质体,采用质谱仪鉴定DSPE-PEG2000-NGR的分子量和采用HPLC-ELSD进行测定导向磷脂化合物NGR多肽的偶联率。2.NGR导向磷脂化合物比例对脂质体性质的影响：分别选取0.32%、0.64%、1.28%NGR导向磷脂化合物三个比例,以薄膜蒸发法制备以香豆素-6为荧光探针的NGR修饰脂质体,比较三种NGR修饰脂质体的药剂学性质,以人脐静脉内皮细胞(HUVEC, CD13表达)为细胞模型,采用流式细胞仪分析三种NGR修饰脂质体的细胞摄取的差异。3.NGR修饰脂质体的肿瘤血管靶向性：分别以香豆素-6和Di.r探针,以薄膜蒸发法制备NGR修饰与未修饰脂质体。选用人成纤维肉瘤细胞(HT1080,CD13高表达)、HUVEC、人冠状动脉内皮细胞(HCAEC, CD13无表达细胞)作为细胞模型采用流式细胞仪考察脂质体的细胞摄取差异,采用激光共聚焦观察脂质体在细胞内随时间的分布。以接种HT1080的裸鼠为动物模型,采用活体成像系统分析NGR修饰脂质体的肿瘤血管靶向性和体内的分布情况。MTT法考察NGR修饰与未修饰载药脂质体对靶细胞生长的影响。4.不同磷脂组成对NGR修饰脂质体性质的影响：选取SPC、HSPC、DPPC、和复合磷脂(SPC:HSPC=3:1)四种不同磷脂组成来制备NGR修饰香豆素-6脂质体,通过药剂学性质考察其稳定性。以人成纤维肉瘤细胞(HT1080, CD13高度表达)为细胞模型,以接种HT1080的裸鼠为动物模型,利用流式细胞仪考察脂质体的细胞摄取效率,MTT法考察脂质体对细胞的生长影响。分别采用激光共聚焦观察和活体成像系统分析不同磷脂组成脂质体在细胞内和裸鼠体内的分布。5.NGR修饰的载药脂质体的抗肿瘤药效和细胞内药物分布：采用MTT法考察了马钱子生物类碱成分对肝癌细胞株SMMC7721的毒性。以HT1080为细胞模型,马钱子总生物碱和马钱子碱为药物模型,用HPLC测定NGR修饰与未修饰的载药脂质体在不同时间下在细胞内的药物浓度。最后,采用Annexin V-PI法和流式细胞仪分析了载药脂质体对细胞的凋亡作用。结果：1.NGR导向磷脂化合物的合成与鉴定：成功合成NGR导向磷脂化合物,并测得的DSPE-PEG2000-NGR的分子量为3388.0,和理论的分子量相符。偶联率为(51.59±4.69)%。2.NGR导向磷脂化合物比例对脂质体性质的影响：三种比例NGR修饰的脂质体的包封率都在90%以上,性质稳定。在细胞摄取实验中,发现0.64%NGR导向磷脂化合物修饰的脂质体细胞摄取明显强于0.32%和1.28%修饰的脂质体。3.NGR修饰脂质体的肿瘤血管靶向性：在细胞摄取实验中,同一条件下,HT1080和HUVEC对NGR修饰脂质体组摄取明显高于未修饰组,在阴性细胞HCAEC中没有明显的差异。动物实验中,NGR修饰组在荷瘤裸鼠处的聚集明显高于未修饰组。MTT实验发现NGR修饰脂质体比未修饰脂质体对细胞的生长抑制作用更加明显。4.不同磷脂组成对NGR修饰脂质体性质的影响：结果发现复合磷脂(SPC:HSPC=3:1)药剂学性质和细胞摄取效率显著的优于单一磷脂组成DPPC、SPC. HSPC脂质体,激光共聚焦观察发现四种不同磷脂组成脂质体均分布在细胞核外的细胞质中,随着时间增加逐渐向细胞核周围聚集,但不能进入到细胞核中。MTT实验发现,复合磷脂组的对细胞的生长抑制作用明显强于单一磷脂组。5.NGR修饰的载药脂质体的抗肿瘤药效和细胞内药物分布：MTT实验中,马钱子总生物碱、马钱子碱、士的宁的IC50为64.38、65.98、415.32μ g/mL。在细胞凋亡实验中,在一定浓度下,对HT1080的总凋亡率排序为载药NGR修饰脂质体>载药未修饰脂质体>游离药物。结论：本文建立了NGR导向磷脂化合物的合成和鉴定方法,筛选出了制备NGR修饰脂质体的最优的导向磷脂化合物比例为0.64%,发现NGR修饰的复合磷脂脂质体相比于单一磷脂DPPC、HSPC、SPC脂质体具有更高的细胞摄取效率和体内肿瘤部位的聚集效果。肿瘤靶向性实验证明了NGR修饰脂质体具有良好的肿瘤血管靶向性。与未修饰的脂质体相比,NGR修饰的脂质体入胞效率更高,具有更强的抗肿瘤效果和促进细胞凋亡的作用。